作者nightA (in dispute)
看板Biotech
标题[求救] real-time PCR 选到绝对定量?
时间Mon May 14 19:24:55 2012
不好意思有几个问题想请问大家
1.我使用ABI 7500 机器上Real-time PCR
结果不小心选到绝对定量@@(本来应该要用相对定量)
但我从头到尾也没有设过甚麽原始浓度等等之类的东西
请问这样机器帮我算出来的CT值是可信的吗?orz
2.另外想问CT值的可信范围是不是大约在15-35个Cycle左右?
3.我是抽动物组织的RNA翻cDNA後上real-time
我同样的实验会重复两到三次,比如二月牺牲一次,三月牺牲一次
(一样的实验,不同批老鼠)
请问我可以二月的组织上一次qPCR,三月的组织上一次qPCR
然後把两次结果加在一起做成一张图吗?
毕竟想早点看到结果,可能二月份的做出来有差异
然後三月份的做一次,两次结果加在一起这样
还是应该要二月跟三月抽出来的的RNA一起上real-time比较好?
(但是这样well好像不够)
谢谢大家了
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.120.31
1F：→ dota01:可以装SDS2.4 把AQ转RQ 05/14 21:53
2F：推 qiet:1.没差 2.一般会落在这里面 但要确定你的反应在>30 cycle还是 05/15 01:04
3F：→ qiet:稳定的 05/15 01:04
4F：→ qiet:3. 可以加在一起 只要你每次转RT取的RNA量一样 使用的reagent 05/15 01:05
5F：→ qiet:也都一样 但可以在跑下一个月的时候放几只前一个月的当对照 05/15 01:05
6F：→ qiet:确认批与批之间操作是否一致 05/15 01:06
7F：推 batatas:CT值的可信范围看曲线比比较准 05/16 21:58