作者starjim (Jim)
看板Biotech
標題[求救] CHIP sonication 急
時間Sun Apr 15 18:09:01 2012
目前在做chromatin IP
今天收完細胞後加入formadehyde完再加入glycine
之後用PBS wash細胞
接著加入lysis buffer完
用SONICATOR 3000; Misonix進行sonication
條件是:on 10sec off:30 sec pulses:10 12W
跑完膠後感覺切的不是很好
但要等到明天才能跟老師討論
所以不知道可不可以把它放在-80度C冰箱儲存O/N
因為抗體貴所以不敢先直接加抗體放O/N
現在擔心的是放-80是否會使protein crosslink產生變化
進而影響我要做的後續分析
感謝~非常急
謝謝高手回答
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 203.71.94.31
1F：→ Ianthegood:不必放-80吧 4度就可以了吧 有加protease inhibitor? 04/15 18:38
2F：→ Ianthegood:-80 crosslink不會有事不過怕你的DNA會受傷 04/15 18:39
3F：→ starjim:我有加~ 04/15 18:48
4F：→ starjim:DNA不能承受-80嗎? 04/15 18:48
5F：→ starjim:LYSIS buffer中有加入PMSF&Na3PO4&leupeptin 04/15 18:49
6F：→ Ianthegood:freeze/thaw會斷 不過反正你ip都要搖o/n了表示 04/15 19:12
7F：→ Ianthegood:stability不會太慘才對 04/15 19:12
8F：→ Ianthegood:我做的是rip 震完分裝進-80 不過你如果沒有要長期儲存 04/15 19:14
9F：→ Ianthegood:應該沒差吧(菸) 04/15 19:14
10F：→ starjim:我剛剛把它放在-20了~應該可以吧= = 04/15 19:15