作者starjim (Jim)
看板Biotech
标题[求救] CHIP sonication 急
时间Sun Apr 15 18:09:01 2012
目前在做chromatin IP
今天收完细胞後加入formadehyde完再加入glycine
之後用PBS wash细胞
接着加入lysis buffer完
用SONICATOR 3000; Misonix进行sonication
条件是:on 10sec off:30 sec pulses:10 12W
跑完胶後感觉切的不是很好
但要等到明天才能跟老师讨论
所以不知道可不可以把它放在-80度C冰箱储存O/N
因为抗体贵所以不敢先直接加抗体放O/N
现在担心的是放-80是否会使protein crosslink产生变化
进而影响我要做的後续分析
感谢~非常急
谢谢高手回答
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.71.94.31
1F：→ Ianthegood:不必放-80吧 4度就可以了吧 有加protease inhibitor? 04/15 18:38
2F：→ Ianthegood:-80 crosslink不会有事不过怕你的DNA会受伤 04/15 18:39
3F：→ starjim:我有加~ 04/15 18:48
4F：→ starjim:DNA不能承受-80吗? 04/15 18:48
5F：→ starjim:LYSIS buffer中有加入PMSF&Na3PO4&leupeptin 04/15 18:49
6F：→ Ianthegood:freeze/thaw会断 不过反正你ip都要摇o/n了表示 04/15 19:12
7F：→ Ianthegood:stability不会太惨才对 04/15 19:12
8F：→ Ianthegood:我做的是rip 震完分装进-80 不过你如果没有要长期储存 04/15 19:14
9F：→ Ianthegood:应该没差吧(菸) 04/15 19:14
10F：→ starjim:我刚刚把它放在-20了~应该可以吧= = 04/15 19:15