作者leftc (阿左)
看板Biotech
標題[求救] 經由大腸桿菌增殖的質體會變大...?
時間Sun Apr 15 01:48:10 2012
http://dl.dropbox.com/u/12159613/0415.png
(相機對焦沒對準請多包涵..)
Lane3,4是3ml菌液抽完質體後切EcoRI的結果
從此批菌液再養大量到1L後取3ml出來抽質體切EcoRI結果為Lane1,2
發現較大的片段整整變大了快1k
但切出來的小片段似乎不受影響
菌種是DH5a , 質體是pGEMTeasy
1% gel in 1x TAE , DNA 染劑是 anla red loading dye 6x
這已經發生好幾次了，可是網路上怎查都沒有相似問題
只好來問問大家有沒有類似經驗了
我個人有點懷疑是DNA安全染劑的問題? 可是想不出關聯性...
懇請先進們解惑... 感激不盡
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.121.71.147
1F：推 TAKONA:看看你的plasmid是否有可能recombination 04/15 01:54
2F：→ TAKONA:DH5 alpha有recombinase，我們家會把這類質體換到Stbl2 04/15 01:55
3F：推 TAKONA:抱歉說錯，DH5 alpha是rec- 04/15 01:58
4F：推 Realthugz:恩 現在的幾乎是recA- 04/15 02:05
5F：推 TAKONA:commercial應該是啦，不過我們家都是自己做就是了 04/15 02:45
6F：→ NKTcell:菌液是單一菌相嗎? 04/15 03:45
7F：→ milkpa:定序，如果insert正確就不理它，因為這應該不是最終的質體 04/15 09:35
8F：推 tsubasawolfy:pGENTeasy是promega的 TA vector 就像上面說的insert 04/15 10:53
9F：→ tsubasawolfy:對就不理好了 04/15 10:53
10F：→ blence:是DNA染劑的問題,而且不只大的,連小片段也都一起往上跑 04/15 14:12
11F：→ blence:是DNA染劑的問題,而且不只大的,連小片段也都一起往上跑 04/15 14:14
12F：→ blence:尤其是像未純化的PCR產物在安全染劑跟BtBr的位置差異更明顯 04/15 14:17
13F：推 aeroufo:要不要調整Loading量，感覺你loading的很多，這樣也會影響 04/16 10:49
14F：→ aeroufo:跑出來的位置，而且越大的SIZE越跑不開 04/16 10:50
15F：→ leftc:=======感謝大家的建議,一個一個檢查後發現真的是染劑的問題 04/17 23:32
16F：→ leftc:======用EtBr後 band恢復到原本的位置了 04/17 23:33
17F：推 joseph103331:有解有學到有推XDDD 04/17 23:34