作者leftc (阿左)
看板Biotech
标题[求救] 经由大肠杆菌增殖的质体会变大...?
时间Sun Apr 15 01:48:10 2012
http://dl.dropbox.com/u/12159613/0415.png
(相机对焦没对准请多包涵..)
Lane3,4是3ml菌液抽完质体後切EcoRI的结果
从此批菌液再养大量到1L後取3ml出来抽质体切EcoRI结果为Lane1,2
发现较大的片段整整变大了快1k
但切出来的小片段似乎不受影响
菌种是DH5a , 质体是pGEMTeasy
1% gel in 1x TAE , DNA 染剂是 anla red loading dye 6x
这已经发生好几次了，可是网路上怎查都没有相似问题
只好来问问大家有没有类似经验了
我个人有点怀疑是DNA安全染剂的问题? 可是想不出关联性...
恳请先进们解惑... 感激不尽
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.121.71.147
1F：推 TAKONA:看看你的plasmid是否有可能recombination 04/15 01:54
2F：→ TAKONA:DH5 alpha有recombinase，我们家会把这类质体换到Stbl2 04/15 01:55
3F：推 TAKONA:抱歉说错，DH5 alpha是rec- 04/15 01:58
4F：推 Realthugz:恩 现在的几乎是recA- 04/15 02:05
5F：推 TAKONA:commercial应该是啦，不过我们家都是自己做就是了 04/15 02:45
6F：→ NKTcell:菌液是单一菌相吗? 04/15 03:45
7F：→ milkpa:定序，如果insert正确就不理它，因为这应该不是最终的质体 04/15 09:35
8F：推 tsubasawolfy:pGENTeasy是promega的 TA vector 就像上面说的insert 04/15 10:53
9F：→ tsubasawolfy:对就不理好了 04/15 10:53
10F：→ blence:是DNA染剂的问题,而且不只大的,连小片段也都一起往上跑 04/15 14:12
11F：→ blence:是DNA染剂的问题,而且不只大的,连小片段也都一起往上跑 04/15 14:14
12F：→ blence:尤其是像未纯化的PCR产物在安全染剂跟BtBr的位置差异更明显 04/15 14:17
13F：推 aeroufo:要不要调整Loading量，感觉你loading的很多，这样也会影响 04/16 10:49
14F：→ aeroufo:跑出来的位置，而且越大的SIZE越跑不开 04/16 10:50
15F：→ leftc:=======感谢大家的建议,一个一个检查後发现真的是染剂的问题 04/17 23:32
16F：→ leftc:======用EtBr後 band恢复到原本的位置了 04/17 23:33
17F：推 joseph103331:有解有学到有推XDDD 04/17 23:34