最近看了三篇文章 J. Mol. Biol. 1983, 166, 557-580 J. Virol. 1996, 70, 4805-4810 J. Virol. 2000, 74, 505-512 這三篇是一串的，主要討論transformation 尤以最後一篇，貼近我目前打算做的東西 其中主要是講到兩條plasmid做homologous recombination 目前我有一條pTG5412長度約33Kb，已經順利transformation，並且純化plasmid 另外的就是clone了以pTCAV為載體的六條target gene，長度約2kb 我想要用homologous recombination的方式把我的target gene knock 到pTG5412上 可是問題來了 同學跟我說直接把兩條plasmid放到DK/E1-1細胞，做transfection 在細胞裡面就有homologous recombination 可是paper是提到要先將我的target gene從vector上先切出來(保留同原部分) 然後將pTG5412切成linear之後做transformation在E. coli裡面 產生homologous recombination之後 screen並purify DNA 之後再丟到DK cell做transfection 針對paper提到的transformation， 他們只提到把兩條linearize的DNA做transformation 並未提到方法 我於是就往上追了兩篇文章 就是第一篇，也只提到可以做co-transformation 只是相容性跟比例問題要兼顧 這裡就衍生了一個問題 我知道照作者的態度可能就是在transformation的過程當中， 加入兩條DNA，其他照舊 可是如果是這樣的話 我可以假設 因為我現在已經有含pTG5412的細胞 我可以針對這個細胞再做一次transformation嗎? 因為效率一定比co transformation還高 畢竟pTG5412的33Kb 真的快搞死我了 現在不但要再搞一次33kb還要再co transform另一條2kb的DNA 我不敢想像那個成功率有多低 但是這個做法有一個差異 就是那條pTG5412不會是linear form!! 可是，這樣子會影響homologous recombination嗎? 我是很想都試試看 可是老闆叫我停 要我想出一條正確的，然後再跟他報告 我看的書真的不夠多 所以我真的不知道上述的三種做法差別在哪裡? transfection, co-transformation and re-transformation!! 我蠢了@@ 有大哥大姐願意賜教的嗎??!! --

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