最近看了三篇文章 J. Mol. Biol. 1983, 166, 557-580 J. Virol. 1996, 70, 4805-4810 J. Virol. 2000, 74, 505-512 这三篇是一串的，主要讨论transformation 尤以最後一篇，贴近我目前打算做的东西 其中主要是讲到两条plasmid做homologous recombination 目前我有一条pTG5412长度约33Kb，已经顺利transformation，并且纯化plasmid 另外的就是clone了以pTCAV为载体的六条target gene，长度约2kb 我想要用homologous recombination的方式把我的target gene knock 到pTG5412上 可是问题来了 同学跟我说直接把两条plasmid放到DK/E1-1细胞，做transfection 在细胞里面就有homologous recombination 可是paper是提到要先将我的target gene从vector上先切出来(保留同原部分) 然後将pTG5412切成linear之後做transformation在E. coli里面 产生homologous recombination之後 screen并purify DNA 之後再丢到DK cell做transfection 针对paper提到的transformation， 他们只提到把两条linearize的DNA做transformation 并未提到方法 我於是就往上追了两篇文章 就是第一篇，也只提到可以做co-transformation 只是相容性跟比例问题要兼顾 这里就衍生了一个问题 我知道照作者的态度可能就是在transformation的过程当中， 加入两条DNA，其他照旧 可是如果是这样的话 我可以假设 因为我现在已经有含pTG5412的细胞 我可以针对这个细胞再做一次transformation吗? 因为效率一定比co transformation还高 毕竟pTG5412的33Kb 真的快搞死我了 现在不但要再搞一次33kb还要再co transform另一条2kb的DNA 我不敢想像那个成功率有多低 但是这个做法有一个差异 就是那条pTG5412不会是linear form!! 可是，这样子会影响homologous recombination吗? 我是很想都试试看 可是老板叫我停 要我想出一条正确的，然後再跟他报告 我看的书真的不够多 所以我真的不知道上述的三种做法差别在哪里? transfection, co-transformation and re-transformation!! 我蠢了@@ 有大哥大姐愿意赐教的吗??!! --

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