如果UV壞了, 妳看到的是平的UV line, 雜訊這麼大,就我所知有兩各可能的原因 1. 妳的column進空氣了; 2. flow-cell很髒 (請熟析FPLC的同事還是朋友幫你處理一下) 我看起來你的sample都沒有進去column, 反倒是空氣進去了 誠心建議你, 找附近實驗室有沒有人熟悉FPLC的,直接示範一次 ※ 引述《betouched (上上下下)》之銘言： : update 資訊與方法,我的FPLC都沒有出現peak 不知道問題在哪裡 : 用打的描述方法有點困難,所以我將照片上傳到dropbox : http://0rz.tw/lHY8Y 這是我打出來的圖,UV是那很雜的那條,雜訊很大,沒轍 : http://0rz.tw/oCOoA 方法前半段 : http://0rz.tw/YoFue 方法後半段 : http://0rz.tw/aQpOI Gradient 曲線 : http://0rz.tw/hVfWp 前人留下來的圖,打出來應該要長這樣 : 我是在run方法之前.就先inject sample : 我手動將 injection valve 轉到 inject 然後打1ml 0.2mg/ml 的sample : 再轉到 load 然後按下 run : ps.由於實在都沒有peak 所以我連,先 load 在 inject 都玩過了 : Setup Lamp Run Time 顯示 : Hg 22218h : 其實我一直認為是 Lamp 問題,使用說明書上寫的是 run time : 我的認知是,燈泡使用時間,所以我認為Lamp已經該換了 : 可是我這邊的博後 : 堅持說他之前才換過,那是倒數時間 : 這個博後,我真的有說不完的想罵他的話 : 覺得還是自救比較快 : 使用的儀器 : Pump P-920 : UPC-900 : ※ 引述《betouched (上上下下)》之銘言： : : 之前用FPLC的學長姐不見了之後我才進實驗室 : : 現在一個人在努力學習怎麼用這個儀器 : : 儀器 AKTA FPLC : : 軟體 Unicorn : : Column : resource Q 1ml : : Method:沿用前人的 method : : 1. wash by water : : 2. wash by protein solution AB for 20 min : : 這期間我用 protein solution A 洗了 sample loop (2ml) : : 然後 inject sample into sample loop for 1 ml (0.25mg/ml) : : 有確定此時 InjectionValve 是block住的 : : 3. injection : : 這裡螢幕上顯示不是很明瞭 : : 0.02min InjectionValve inject : : 0.02min Block Sample_Injection : : 0.02min Base Volumn : : 2.02min End Block : : 2.02min InjectionValve Load : : 2.02min End Block : : . : : . : : . : : 4. Gradient B from 0-100% for 40 min : : 標準品應該在20分鐘左右出來<可是UV還是保持在0上下跳動 : : 5. 哭哭 : : 一個人看著 FPLC 使用說明書,東弄弄西弄弄得,真是頭大,來個人幫幫我吧 哭哭 : : ◆ From: 147.126.101.168 : : 推 bluep:簡述一下你的column和method, 大家才有辦法幫你找問題 03/16 14:32 : : 推 iosteven:這一台操作 很簡單= ="你的動相 梯度 方法 跟目的等資訊 03/17 13:39 : : → iosteven:要說明白才可以幫你^^，基本上設定好固定時間收吸收峰 03/17 13:40 : : → iosteven:的樣品，是最簡單的目的，是要純化或分Fraction..... 03/17 13:41 --

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