作者garlic774 (蒜頭)
看板Biotech
標題[求救] 關於RT-PCR mRNA的QC與濃度問題
時間Wed Mar 21 19:43:22 2012
如題
小弟目前在進行animal tissue(cell culture)的RT-PCR
當時低密度的種到6 well 的plate中
第七天收以RLT 1ml/well去收細胞
再進行RT-PCR(promega)
可是遇到兩個問題
1.最後測的RNA的濃度只有10 ng/ul，不知道是細胞一開始都沒收下來，還是RNA
降解得太快?這樣去上PCR，能轉的出來嗎?
2.260/230 = 0.2
260/280 = 2
QC很差，是有機物汙染太嚴重了嗎?如果是要如何解決?
謝謝!!!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.24.23.219
※ 編輯: garlic774 來自: 114.24.23.219 (03/21 19:55)
1F：→ williamyang:10 ug/ul很濃的說,該不會是10 ng/ul吧? 03/21 21:18
※ 編輯: garlic774 來自: 114.24.23.219 (03/21 21:37)
2F：→ garlic774:是ng沒錯，謝謝W大 03/21 21:37
3F：→ Ianthegood:qc的值在濃度太低的時候就沒什麼參考價值了 03/22 02:42
4F：→ Ianthegood:應該把前面culture還有抽的protocol reagent講一下吧 03/22 02:42
今天和學長討論過
發現有三個問題
1.在用RLT溶解細胞時，沒用刮杓
2.因為是一個well 1ml的RLT 輪流用在每個well，每次RLT都會殘留在上一個well
3.在晰出RNA時應該用應降低RNAse free water(20ul -> 15ul)
不曉得還有甚麼可以改進的地方呢?
※ 編輯: garlic774 來自: 140.112.131.184 (03/22 13:59)
5F：→ huuban:我有看過完全smear的RNA 260/280有1.9以上唷 03/24 00:35
6F：→ huuban:你說的 QC 是 Bioanalyzer 嗎？ 03/24 00:35