作者garlic774 (蒜头)
看板Biotech
标题[求救] 关於RT-PCR mRNA的QC与浓度问题
时间Wed Mar 21 19:43:22 2012
如题
小弟目前在进行animal tissue(cell culture)的RT-PCR
当时低密度的种到6 well 的plate中
第七天收以RLT 1ml/well去收细胞
再进行RT-PCR(promega)
可是遇到两个问题
1.最後测的RNA的浓度只有10 ng/ul，不知道是细胞一开始都没收下来，还是RNA
降解得太快?这样去上PCR，能转的出来吗?
2.260/230 = 0.2
260/280 = 2
QC很差，是有机物污染太严重了吗?如果是要如何解决?
谢谢!!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.24.23.219
※ 编辑: garlic774 来自: 114.24.23.219 (03/21 19:55)
1F：→ williamyang:10 ug/ul很浓的说,该不会是10 ng/ul吧? 03/21 21:18
※ 编辑: garlic774 来自: 114.24.23.219 (03/21 21:37)
2F：→ garlic774:是ng没错，谢谢W大 03/21 21:37
3F：→ Ianthegood:qc的值在浓度太低的时候就没什麽参考价值了 03/22 02:42
4F：→ Ianthegood:应该把前面culture还有抽的protocol reagent讲一下吧 03/22 02:42
今天和学长讨论过
发现有三个问题
1.在用RLT溶解细胞时，没用刮杓
2.因为是一个well 1ml的RLT 轮流用在每个well，每次RLT都会残留在上一个well
3.在晰出RNA时应该用应降低RNAse free water(20ul -> 15ul)
不晓得还有甚麽可以改进的地方呢?
※ 编辑: garlic774 来自: 140.112.131.184 (03/22 13:59)
5F：→ huuban:我有看过完全smear的RNA 260/280有1.9以上唷 03/24 00:35
6F：→ huuban:你说的 QC 是 Bioanalyzer 吗？ 03/24 00:35