作者yousaythat (Din)
看板Biotech
標題[討論] Western Blot蛋白質跑膠
時間Mon Feb 27 23:50:38 2012
請問各位WB蛋白質跑膠有沒有什麼技巧可以讓band跑出來比較平整,美一點嗎?
或是有沒有什麼其他可以注意的地方,小撇步??
感謝大家!!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.46.116.98
1F：推 leoblack:要不要po一下你的condition好讓大家trouble shooting?! 02/28 01:35
2F：→ FireHell:先用低電壓讓它通過上膠後再調高至所需電壓 02/28 02:35
3F：推 joseph103331:推樓上 小心點可以全程用低電壓跑 還有膠凝好的問題 02/28 09:53
4F：推 LIAR:所以高低電壓的分界點和band當時在哪裡會影響到漂不漂亮囉？ 02/28 10:18
5F：推 ballycotton7:製膠盡量混勻 Transfer時如果放膠的時候膠被擠壓到 02/28 11:34
6F：→ ballycotton7:你的band出來的形狀也會歪掉 02/28 11:35
7F：→ yousaythat:感覺我load完要跑的時候都糊掉了,而且跑的時候形狀並 02/28 17:48
8F：→ yousaythat:不是很平整,會有中間凹陷的問題~~不知道是load的問題 02/28 17:49
9F：→ yousaythat:還是saple沒弄好??? 02/28 17:49
10F：→ f52cya:常常是sample體積太多,10ul以下比較好 02/28 19:25
11F：推 begrace:loading sample體積要一樣多，不然容易歪掉 02/28 21:03
12F：→ yousaythat:不過蛋白質定量之後為了取同樣濃度,體積不一定會一樣耶 02/28 22:28
13F：→ yousaythat:是要用5x dye把它補到大家體積都一樣嗎?? 02/28 22:28
14F：推 leoblack:用1X dye補到同體積~跑慢一點也會比較漂亮 02/28 22:59
15F：→ FireHell:要用5X dye和ddwater稀釋到濃度相同，體積才會一樣 02/29 13:09
16F：推 lyu0001:我反而想知道如何讓band解析度更好 03/01 23:56
17F：推 martyrtitan:低電壓跑 我習慣60V過上膠 再調到80 or 100跑到完 03/02 00:19
18F：→ martyrtitan:但是大分子的我用低電壓跑反而都看不到=口=" 03/02 00:19
19F：推 jabari:1. 新鮮的buffer 2.低電壓 3.冷氣房 4.睡個覺起來再說 03/03 00:12