作者yousaythat (Din)
看板Biotech
标题[讨论] Western Blot蛋白质跑胶
时间Mon Feb 27 23:50:38 2012
请问各位WB蛋白质跑胶有没有什麽技巧可以让band跑出来比较平整,美一点吗?
或是有没有什麽其他可以注意的地方,小撇步??
感谢大家!!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.46.116.98
1F：推 leoblack:要不要po一下你的condition好让大家trouble shooting?! 02/28 01:35
2F：→ FireHell:先用低电压让它通过上胶後再调高至所需电压 02/28 02:35
3F：推 joseph103331:推楼上 小心点可以全程用低电压跑 还有胶凝好的问题 02/28 09:53
4F：推 LIAR:所以高低电压的分界点和band当时在哪里会影响到漂不漂亮罗？ 02/28 10:18
5F：推 ballycotton7:制胶尽量混匀 Transfer时如果放胶的时候胶被挤压到 02/28 11:34
6F：→ ballycotton7:你的band出来的形状也会歪掉 02/28 11:35
7F：→ yousaythat:感觉我load完要跑的时候都糊掉了,而且跑的时候形状并 02/28 17:48
8F：→ yousaythat:不是很平整,会有中间凹陷的问题~~不知道是load的问题 02/28 17:49
9F：→ yousaythat:还是saple没弄好??? 02/28 17:49
10F：→ f52cya:常常是sample体积太多,10ul以下比较好 02/28 19:25
11F：推 begrace:loading sample体积要一样多，不然容易歪掉 02/28 21:03
12F：→ yousaythat:不过蛋白质定量之後为了取同样浓度,体积不一定会一样耶 02/28 22:28
13F：→ yousaythat:是要用5x dye把它补到大家体积都一样吗?? 02/28 22:28
14F：推 leoblack:用1X dye补到同体积~跑慢一点也会比较漂亮 02/28 22:59
15F：→ FireHell:要用5X dye和ddwater稀释到浓度相同，体积才会一样 02/29 13:09
16F：推 lyu0001:我反而想知道如何让band解析度更好 03/01 23:56
17F：推 martyrtitan:低电压跑 我习惯60V过上胶 再调到80 or 100跑到完 03/02 00:19
18F：→ martyrtitan:但是大分子的我用低电压跑反而都看不到=口=" 03/02 00:19
19F：推 jabari:1. 新鲜的buffer 2.低电压 3.冷气房 4.睡个觉起来再说 03/03 00:12