作者barbarlas (barbie)
看板Biotech
標題[求救] transfer protein轉不過去
時間Tue Feb 7 22:31:29 2012
我要看的protein在42~68KD之間
我用12%的SDS-page
之後用wet transfer(biorad) 45V,1.5hr或25V overnight
membrance是使用PVDF(0.45)有浸泡methanol數秒
從55KD的protein就轉不過去了
請問我該怎麼辦??
我的tramsfer buffr配方為
tris-base 3.03g,glycine 72g,methanol 200ml,PH8.3
順便我想請問我看大部份的人都是流電流
請問定電壓和定電流差別在哪
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 118.167.247.205
1F：推 williamyang:我配方tris-base 3.03g,glycine 14.4g,methanol 200ml 02/07 22:53
2F：→ williamyang:SDS 0.375g, 不需要調PH值. Transfer 0.5A, 40分鐘 02/07 22:55
3F：→ skybreeze:13724剛好有提到電壓跟電流的差別 02/08 00:36
4F：推 keeny:加個rainbow or see blue marker當control,如果marker轉得 02/13 02:02
5F：→ keeny:過去,那就是你antibody or ECL reagents的問題了 02/13 02:03
6F：→ keeny:不要局限在transfer上above條件和配方都可讓蛋白transfer 02/13 02:07