作者barbarlas (barbie)
看板Biotech
标题[求救] transfer protein转不过去
时间Tue Feb 7 22:31:29 2012
我要看的protein在42~68KD之间
我用12%的SDS-page
之後用wet transfer(biorad) 45V,1.5hr或25V overnight
membrance是使用PVDF(0.45)有浸泡methanol数秒
从55KD的protein就转不过去了
请问我该怎麽办??
我的tramsfer buffr配方为
tris-base 3.03g,glycine 72g,methanol 200ml,PH8.3
顺便我想请问我看大部份的人都是流电流
请问定电压和定电流差别在哪
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.167.247.205
1F：推 williamyang:我配方tris-base 3.03g,glycine 14.4g,methanol 200ml 02/07 22:53
2F：→ williamyang:SDS 0.375g, 不需要调PH值. Transfer 0.5A, 40分钟 02/07 22:55
3F：→ skybreeze:13724刚好有提到电压跟电流的差别 02/08 00:36
4F：推 keeny:加个rainbow or see blue marker当control,如果marker转得 02/13 02:02
5F：→ keeny:过去,那就是你antibody or ECL reagents的问题了 02/13 02:03
6F：→ keeny:不要局限在transfer上above条件和配方都可让蛋白transfer 02/13 02:07