作者boblu (六百)
看板Biotech
標題Re: [求救] western抗體reuse
時間Mon Dec 26 04:04:44 2011
※ 引述《suhow (單身一輩子..)》之銘言：
: 各位作western的初級抗體都會reuse嗎?
: 通常都是1:1000浸泡在5% milk/PBSt吧
要 reuse 通常不會放牛奶 或用牛奶的話最多在幾天內 reuse
要長期 reuse 用 BSA 或／與血清較好
可加一點 NaN3 當然，後續的 wash 要注意一點
至於說可以 reuse 多少次／保存多久
實在是 case by case
極端一點的是聽說過有人整篇論文只用同一管 working solution 用到畢業
: 置於-20度冰箱，通常都reuse幾次呢?
別這樣啊老大 O_o
蛋白質溶液不宜反覆冷凍解凍啊
: =========================================
: 最近常常跑不出來，連band的痕跡都沒有，
: 底片空空如也，不知道是哪裡出問題了.....
: 之前transfer一片都壓得出來，可是只要同時transfer兩片就壓不出來
: 是不是多加一片，transfer的電壓或是電流就要增加?
要先檢查是 transfer 有問題？還是染抗體有問題？
先把你的 membrane 拿去染染看 確認有沒有 protein
不過話說我現在忽然忘記染完還可以拿去作 western 的染色法叫啥了
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 97.92.4.12
1F：→ Invec:Ponceau S 12/26 04:38
2F：推 leoblack:其實還是case by case,有加牛奶且放-20也有可reuse很久的 12/26 08:56
3F：推 yllai1029:我也有用過加1.5%牛奶且放-20℃ 目前用到第三次吧XD 12/26 09:22
4F：→ gryou:我 GAPDH 一抗用了兩年 二抗用一年 好的抗體真的都可放挺久 12/26 12:07
5F：推 yuasa:Actin那種強得要命的真的可以用到天荒地老，弱的(或目標蛋白 12/26 15:26
6F：→ yuasa:很少)，全新的跟用過一次的壓出來清晰度就有差 12/26 15:27
7F：推 suhow:謝謝各位喔 12/26 18:46
8F：→ icome:有推薦的GAPDH抗體嗎 強到爆的那種 像sigma的actin超好用 12/26 20:05
9F：推 lyu0001:壓500x看看，雖然廠商都寫建議1000x~10000x 12/26 20:26
10F：推 lyu0001:實際上可能要用到500x甚至200x。 12/26 20:29
11F：推 lyu0001:很難有便宜又好用的抗體 > < 12/26 20:32
12F：→ a001ou:牛奶沒加NaN3四度西大概放一天就臭掉了 我也不建議牛奶 12/26 21:07
13F：→ gryou:millipore GAPDH 還不錯用！ 12/28 12:52
14F：推 windyflyer:看抗體 同一個抗體不同批買壓出來的band強度也有差 01/03 16:28
15F：→ windyflyer:(我們是這樣啦 平平都是HCV NS5B 這批買的壓一分鐘老師 01/03 16:29
16F：→ windyflyer:說太深..之前壓兩分鐘剛好= =" 01/03 16:29