作者boblu (六百)
看板Biotech
标题Re: [求救] western抗体reuse
时间Mon Dec 26 04:04:44 2011
※ 引述《suhow (单身一辈子..)》之铭言：
: 各位作western的初级抗体都会reuse吗?
: 通常都是1:1000浸泡在5% milk/PBSt吧
要 reuse 通常不会放牛奶 或用牛奶的话最多在几天内 reuse
要长期 reuse 用 BSA 或／与血清较好
可加一点 NaN3 当然，後续的 wash 要注意一点
至於说可以 reuse 多少次／保存多久
实在是 case by case
极端一点的是听说过有人整篇论文只用同一管 working solution 用到毕业
: 置於-20度冰箱，通常都reuse几次呢?
别这样啊老大 O_o
蛋白质溶液不宜反覆冷冻解冻啊
: =========================================
: 最近常常跑不出来，连band的痕迹都没有，
: 底片空空如也，不知道是哪里出问题了.....
: 之前transfer一片都压得出来，可是只要同时transfer两片就压不出来
: 是不是多加一片，transfer的电压或是电流就要增加?
要先检查是 transfer 有问题？还是染抗体有问题？
先把你的 membrane 拿去染染看 确认有没有 protein
不过话说我现在忽然忘记染完还可以拿去作 western 的染色法叫啥了
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 97.92.4.12
1F：→ Invec:Ponceau S 12/26 04:38
2F：推 leoblack:其实还是case by case,有加牛奶且放-20也有可reuse很久的 12/26 08:56
3F：推 yllai1029:我也有用过加1.5%牛奶且放-20℃ 目前用到第三次吧XD 12/26 09:22
4F：→ gryou:我 GAPDH 一抗用了两年 二抗用一年 好的抗体真的都可放挺久 12/26 12:07
5F：推 yuasa:Actin那种强得要命的真的可以用到天荒地老，弱的(或目标蛋白 12/26 15:26
6F：→ yuasa:很少)，全新的跟用过一次的压出来清晰度就有差 12/26 15:27
7F：推 suhow:谢谢各位喔 12/26 18:46
8F：→ icome:有推荐的GAPDH抗体吗 强到爆的那种 像sigma的actin超好用 12/26 20:05
9F：推 lyu0001:压500x看看，虽然厂商都写建议1000x~10000x 12/26 20:26
10F：推 lyu0001:实际上可能要用到500x甚至200x。 12/26 20:29
11F：推 lyu0001:很难有便宜又好用的抗体 > < 12/26 20:32
12F：→ a001ou:牛奶没加NaN3四度西大概放一天就臭掉了 我也不建议牛奶 12/26 21:07
13F：→ gryou:millipore GAPDH 还不错用！ 12/28 12:52
14F：推 windyflyer:看抗体 同一个抗体不同批买压出来的band强度也有差 01/03 16:28
15F：→ windyflyer:(我们是这样啦 平平都是HCV NS5B 这批买的压一分钟老师 01/03 16:29
16F：→ windyflyer:说太深..之前压两分钟刚好= =" 01/03 16:29