作者martyrtitan (Martyrs)
看板Biotech
標題[求救] Western transfer
時間Fri Dec 16 00:00:30 2011
我的Sample是大鼠大腦的total prot. extract
有幾個實驗問題想請教一下大家
1. Transfer時 大家會Try條件到膠上面完全沒有band還是只要抗體抗的到PVDF就好?
(聽學長說因為transfer是一致性的 只要PVDF膜上抗體抗的到就好)
目前我試過幾個條件
25, 37.5, 50ug total protein
10% 6% PAGE (8*9 cm^2)
Transfer 450mA 2, 2.5 & 3hr (補充:濕式 20% Methanol SDS-free)
用comassie blue和Poncea S染
發現不管任何的Transfer條件 在膠上都有殘留
但是Poncea S染PVDF的結果都可以看到明顯的band
我確定沒有transfer過頭 (我放兩層PVDF)
2. 我做2D的結果
細胞骨架(actin, tubulin family)
和其相關蛋白(CRMP2, Profilin-1)有差異 (無法確認是因為PTM還是expression)
我也用WB確認GAPDH不會受改變
但actin好像沒變化...我懷疑是因為overexpression 所以WB無法看出來
請問一下有做過大鼠實驗 有關於腦部發展或plasticity...的前輩們
要如何驗證我的2D結果 (除了回到cell culture以外)
十分感謝~
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.98.129
1F：推 aggaci:濕式?半乾式?那種? 12/16 00:10
※ 編輯: martyrtitan 來自: 114.42.221.26 (12/16 01:31)
2F：推 alaric:那樣看你要的蛋白分子量是多大及特性 vs. % of Methanol 12/24 01:27