作者martyrtitan (Martyrs)
看板Biotech
标题[求救] Western transfer
时间Fri Dec 16 00:00:30 2011
我的Sample是大鼠大脑的total prot. extract
有几个实验问题想请教一下大家
1. Transfer时 大家会Try条件到胶上面完全没有band还是只要抗体抗的到PVDF就好?
(听学长说因为transfer是一致性的 只要PVDF膜上抗体抗的到就好)
目前我试过几个条件
25, 37.5, 50ug total protein
10% 6% PAGE (8*9 cm^2)
Transfer 450mA 2, 2.5 & 3hr (补充:湿式 20% Methanol SDS-free)
用comassie blue和Poncea S染
发现不管任何的Transfer条件 在胶上都有残留
但是Poncea S染PVDF的结果都可以看到明显的band
我确定没有transfer过头 (我放两层PVDF)
2. 我做2D的结果
细胞骨架(actin, tubulin family)
和其相关蛋白(CRMP2, Profilin-1)有差异 (无法确认是因为PTM还是expression)
我也用WB确认GAPDH不会受改变
但actin好像没变化...我怀疑是因为overexpression 所以WB无法看出来
请问一下有做过大鼠实验 有关於脑部发展或plasticity...的前辈们
要如何验证我的2D结果 (除了回到cell culture以外)
十分感谢~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.98.129
1F：推 aggaci:湿式?半乾式?那种? 12/16 00:10
※ 编辑: martyrtitan 来自: 114.42.221.26 (12/16 01:31)
2F：推 alaric:那样看你要的蛋白分子量是多大及特性 vs. % of Methanol 12/24 01:27