作者hoop0227 (阿啾)
看板Biotech
標題[求救] 各種Fusion protein的好處
時間Wed Dec 14 14:31:30 2011
不好意思,
最近我實驗上會用到fusion protein來當作tag,
學長就問我了幾種tag的好處和用途,
1.Thioredoxin (Trx) :
thioredoxin 完全是可溶性，不形成包涵體，此蛋白質的分子量不大，只有11.675 K Da
，而且其N-端及C-端都能由分子的表面接觸到。另外thioredoxin 還有兩個特性：(i)對
熱的穩定性，因此fusion protein 在80℃處理10 分鐘仍然維持可溶狀態，此特性可以被
用來去除大部分的細胞蛋白質；(ii)此蛋白質位於內細胞膜(inner membrane)上，因此可
以利用osmotic shock技術加以回收。
2.Maltose Binding Protein (MBP) :
MBP通常接在目標蛋白質的N-端，與maltose具有很好的親和性，利用maltose粒子管柱進
行純化，使用Maltose溶液將管柱中的目標蛋白沖堤下來，之後再利用特定蛋白酶將MBP從
目標蛋白上剪切下來，即可得到純化的目標蛋白質。
3.Glutathione S Transferase (GST) :
Glutathione S-transferase, GST，與Glutathione具有很好的親和力，利用Glutathione
粒子管柱進行純化，Glutathione溶液可以將管柱中的目標蛋白沖堤下來，之後再利用蛋
白酶(Thrombin)GST從目標蛋白上剪切下來，即可得到純化的目標蛋白質。
4.His Tag : His-tag是最常被使用的蛋白質純化工具，目標蛋白質C-端帶有六個Histidine
，Histidine具有imidazole ring的結構，可與帶二價正電的陽離子相螯和，故可利用帶
有鎳離子（Ni2+）的親和力管柱純化，使用較高濃度的Imidazole solution可以將目標蛋
白沖堤出來。
可是還有Calmodulin Binding peptide (CBP),和NusA這兩種我都找不到,
雖然看到很多人用,可是卻沒有說為何這兩種的用途的差別,
不知道有沒有人可以跟我說呢!?!?
感謝!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.40.22
1F：推 leoblack:常用的還有Flag,V5,myc等 12/14 14:57
3F：推 icome:這些主要是用在E.coli表現蛋白的純化 12/14 19:39
4F：→ icome:除了His 其他或多或少還附帶幫助蛋白folding的能力 12/14 19:39
5F：→ icome:his特別的是 可以在denature的條件下純出你的蛋白 12/14 19:40
6F：→ icome:不過CBP和NusA我沒接觸過 自己經驗是GST做出來最乾淨 12/14 19:48
感謝這位的幫助!!!
這真的是讓我又多了許多經驗了!!
※ 編輯: hoop0227 來自: 210.60.122.1 (12/15 23:57)