作者hoop0227 (阿啾)
看板Biotech
标题[求救] 各种Fusion protein的好处
时间Wed Dec 14 14:31:30 2011
不好意思,
最近我实验上会用到fusion protein来当作tag,
学长就问我了几种tag的好处和用途,
1.Thioredoxin (Trx) :
thioredoxin 完全是可溶性，不形成包涵体，此蛋白质的分子量不大，只有11.675 K Da
，而且其N-端及C-端都能由分子的表面接触到。另外thioredoxin 还有两个特性：(i)对
热的稳定性，因此fusion protein 在80℃处理10 分钟仍然维持可溶状态，此特性可以被
用来去除大部分的细胞蛋白质；(ii)此蛋白质位於内细胞膜(inner membrane)上，因此可
以利用osmotic shock技术加以回收。
2.Maltose Binding Protein (MBP) :
MBP通常接在目标蛋白质的N-端，与maltose具有很好的亲和性，利用maltose粒子管柱进
行纯化，使用Maltose溶液将管柱中的目标蛋白冲堤下来，之後再利用特定蛋白酶将MBP从
目标蛋白上剪切下来，即可得到纯化的目标蛋白质。
3.Glutathione S Transferase (GST) :
Glutathione S-transferase, GST，与Glutathione具有很好的亲和力，利用Glutathione
粒子管柱进行纯化，Glutathione溶液可以将管柱中的目标蛋白冲堤下来，之後再利用蛋
白酶(Thrombin)GST从目标蛋白上剪切下来，即可得到纯化的目标蛋白质。
4.His Tag : His-tag是最常被使用的蛋白质纯化工具，目标蛋白质C-端带有六个Histidine
，Histidine具有imidazole ring的结构，可与带二价正电的阳离子相螯和，故可利用带
有镍离子（Ni2+）的亲和力管柱纯化，使用较高浓度的Imidazole solution可以将目标蛋
白冲堤出来。
可是还有Calmodulin Binding peptide (CBP),和NusA这两种我都找不到,
虽然看到很多人用,可是却没有说为何这两种的用途的差别,
不知道有没有人可以跟我说呢!?!?
感谢!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.40.22
1F：推 leoblack:常用的还有Flag,V5,myc等 12/14 14:57
3F：推 icome:这些主要是用在E.coli表现蛋白的纯化 12/14 19:39
4F：→ icome:除了His 其他或多或少还附带帮助蛋白folding的能力 12/14 19:39
5F：→ icome:his特别的是 可以在denature的条件下纯出你的蛋白 12/14 19:40
6F：→ icome:不过CBP和NusA我没接触过 自己经验是GST做出来最乾净 12/14 19:48
感谢这位的帮助!!!
这真的是让我又多了许多经验了!!
※ 编辑: hoop0227 来自: 210.60.122.1 (12/15 23:57)