作者aken740127 (~^0^~)
看板Biotech
標題[求救] cleavaged Caspase3的western
時間Fri Dec 9 15:57:41 2011
問題:跑western blotting的時候，
以cell signaling的抗體anti caspase 3 (#9662)[1:1000 4度C o/n]
可以看到很明顯的pro-caspase 3 (35 kDa)
以及很微弱的cleavaged caspase 3 (17 kDa)
但是將membrane切開，
單獨壓anti caspase 3(cleavage form)(#9664)[1:500 4度C o/n]，
訊號卻時有時無....= =
後來更改的條件有: protein loading增加為150 ug, 1'Ab 1:250 o/n
但都還是沒有改善
爬文發現好像大家的caspase 3都不太難壓
想請問有人有跟我一樣的狀況嗎??
或者有其他推薦還不錯的牌子可以試試
謝謝大家抽空看看我冗長的文章~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.125.66
1F：推 mesenchymal:之前我#9662,1抗1:1000,protein<60 ug,還是能壓到 12/09 17:37
2F：→ mesenchymal:不過有些細胞訊號或較弱沒錯 我都用BSA blocking 12/09 17:38
3F：→ mesenchymal:5%牛奶之前試過也OK 12/09 17:39
4F：→ aken740127:恩恩 blocking的方式也試過 12/09 18:03
5F：→ aken740127:原先是用5%脫脂奶粉也壓不太出來 12/09 18:05
6F：→ aken740127:其他的band有比較清楚 不過caspase 3還是老樣子 12/09 18:06
7F：→ aken740127:感覺壓caspase3前還要看運氣好才會有一點點訊號...冏rz 12/09 18:08
8F：推 im9527tw:Invitrogen的Caspase 3很好壓,40ug 1:1000 o/n ,pro跟cl 12/09 18:56
9F：→ im9527tw:都很明顯 12/09 18:56
10F：推 tonbushai:但是說不定真的沒有刺激apoptosis吧><?? 12/09 19:25
11F：→ g010377:要不要先確定apoptosis有無被indeced? 12/09 19:34
12F：推 mesenchymal:要不要跑個PI/Annexin V flow 確認看看 12/09 21:12
13F：→ aken740127:但是PARP有被切割 應該是有活化apoptosis?? 12/12 09:03
14F：→ aken740127:PARP不是會被caspase 3切割嗎?? 12/12 09:04
15F：→ f9361046:PARP有被切...就有apoptosis....有些廠牌caspase3很難壓 12/13 21:31