作者aken740127 (~^0^~)
看板Biotech
标题[求救] cleavaged Caspase3的western
时间Fri Dec 9 15:57:41 2011
问题:跑western blotting的时候，
以cell signaling的抗体anti caspase 3 (#9662)[1:1000 4度C o/n]
可以看到很明显的pro-caspase 3 (35 kDa)
以及很微弱的cleavaged caspase 3 (17 kDa)
但是将membrane切开，
单独压anti caspase 3(cleavage form)(#9664)[1:500 4度C o/n]，
讯号却时有时无....= =
後来更改的条件有: protein loading增加为150 ug, 1'Ab 1:250 o/n
但都还是没有改善
爬文发现好像大家的caspase 3都不太难压
想请问有人有跟我一样的状况吗??
或者有其他推荐还不错的牌子可以试试
谢谢大家抽空看看我冗长的文章~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.125.66
1F：推 mesenchymal:之前我#9662,1抗1:1000,protein<60 ug,还是能压到 12/09 17:37
2F：→ mesenchymal:不过有些细胞讯号或较弱没错 我都用BSA blocking 12/09 17:38
3F：→ mesenchymal:5%牛奶之前试过也OK 12/09 17:39
4F：→ aken740127:恩恩 blocking的方式也试过 12/09 18:03
5F：→ aken740127:原先是用5%脱脂奶粉也压不太出来 12/09 18:05
6F：→ aken740127:其他的band有比较清楚 不过caspase 3还是老样子 12/09 18:06
7F：→ aken740127:感觉压caspase3前还要看运气好才会有一点点讯号...冏rz 12/09 18:08
8F：推 im9527tw:Invitrogen的Caspase 3很好压,40ug 1:1000 o/n ,pro跟cl 12/09 18:56
9F：→ im9527tw:都很明显 12/09 18:56
10F：推 tonbushai:但是说不定真的没有刺激apoptosis吧><?? 12/09 19:25
11F：→ g010377:要不要先确定apoptosis有无被indeced? 12/09 19:34
12F：推 mesenchymal:要不要跑个PI/Annexin V flow 确认看看 12/09 21:12
13F：→ aken740127:但是PARP有被切割 应该是有活化apoptosis?? 12/12 09:03
14F：→ aken740127:PARP不是会被caspase 3切割吗?? 12/12 09:04
15F：→ f9361046:PARP有被切...就有apoptosis....有些厂牌caspase3很难压 12/13 21:31