作者Tendin1015 (Tendin)
看板Biotech
標題[求救] 一個 100 mm 的 dish 可以養多少細胞呢？
時間Fri Dec 9 01:13:08 2011
第一次做細胞實驗，實驗室之前也沒有人做過細胞實驗，
所以我想問問各位前輩，進行正式實驗時，一個 dish
裡面可以養到多少細胞呢？因為之後還要跑 western，
不知道怎麼樣的細胞數會比較合適。
另外就是一個 dish 裡面需要含有多少體積的培養基呢？
而在細胞 lysis 時，需要加多少 lysis buffer 比較好呢？
麻煩各位前輩指點，也祝大家實驗順利。
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◆ From: 1.175.86.168
1F：推 FireHell:不要養到全滿就好，體積大概5000~20000cells/mL去換算 12/09 01:58
2F：→ FireHell:實驗前後細胞密度要一致 12/09 01:59
3F：→ FireHell:以10 cm dish而言，通常加10~12 mL medium 12/09 01:59
4F：→ FireHell:lysis buffer的部份要看廠商提供的protocol 12/09 02:01
5F：→ FireHell:一般而言，細胞越大，密度越低；細胞越小，密度越大 12/09 02:02
6F：→ blence:無論是seeding前或收細胞,上面的細胞濃度至少了一個數量級 12/09 09:47
9F：→ Tendin1015:我想用 3x10^6 顆不知道會不會太多? 12/09 12:10
10F：→ Tendin1015:因為我的細胞在 96-well 可以 5x10^4 cells/well 12/09 12:11
11F：→ Tendin1015:謝謝 conective，這對我很有幫助。 12/09 12:13
12F：→ Tendin1015:可是因為我的試驗物質有點昂貴，我想說能不能省一點改 12/09 12:14
13F：→ Tendin1015:用 5~6 ml 的 medium 呢? 12/09 12:14
14F：推 mandible:3三樓你很有錢喔!我都只加6ml而已!! 12/09 12:34
15F：→ mandible:你要看你的細胞大小.來決定你的western量.應該會定量吧! 12/09 12:35
16F：→ Tendin1015:恩，會定量。 所以 medium 用 5 ml 應該也 OK 吧? 12/09 13:26
17F：推 FireHell:抱歉我最前面打錯了，要加一個0。50000~200000 cells/mL 12/09 15:14
18F：→ FireHell:我的sample也超貴(1 mg => 10k)，但是你還是要統一細胞密 12/09 15:15
19F：→ FireHell:度，我指的是你應該跟前面的任何實驗統一密度 12/09 15:18
20F：→ FireHell:因此你medium少細胞也會少，western需要不少的細胞來提供 12/09 15:19
21F：→ FireHell:足夠的蛋白，以我的Hep 3B為例，我濃度是50000 cells/mL 12/09 15:20
22F：→ FireHell:1盤10 mL，CONTROL都一次重三盤全收，大概可以壓十次 12/09 15:20
23F：→ FireHell:每次是50 ug 12/09 15:21
24F：→ alicialai:這些問題實驗室前輩應該都有protocol吧~ 可以詢問看看~ 12/12 05:39
25F：→ alicialai:喔不好意思沒看到您的第一句話~ 抱歉~ 12/12 05:40
26F：→ alicialai:可以去問問隔壁實驗室? 12/12 05:40
27F：→ alicialai:我養RAW cell, 10cm dish, ~90 confluent約3x10^7 cell 12/12 05:42