作者Tendin1015 (Tendin)
看板Biotech
标题[求救] 一个 100 mm 的 dish 可以养多少细胞呢？
时间Fri Dec 9 01:13:08 2011
第一次做细胞实验，实验室之前也没有人做过细胞实验，
所以我想问问各位前辈，进行正式实验时，一个 dish
里面可以养到多少细胞呢？因为之後还要跑 western，
不知道怎麽样的细胞数会比较合适。
另外就是一个 dish 里面需要含有多少体积的培养基呢？
而在细胞 lysis 时，需要加多少 lysis buffer 比较好呢？
麻烦各位前辈指点，也祝大家实验顺利。
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◆ From: 1.175.86.168
1F：推 FireHell:不要养到全满就好，体积大概5000~20000cells/mL去换算 12/09 01:58
2F：→ FireHell:实验前後细胞密度要一致 12/09 01:59
3F：→ FireHell:以10 cm dish而言，通常加10~12 mL medium 12/09 01:59
4F：→ FireHell:lysis buffer的部份要看厂商提供的protocol 12/09 02:01
5F：→ FireHell:一般而言，细胞越大，密度越低；细胞越小，密度越大 12/09 02:02
6F：→ blence:无论是seeding前或收细胞,上面的细胞浓度至少了一个数量级 12/09 09:47
9F：→ Tendin1015:我想用 3x10^6 颗不知道会不会太多? 12/09 12:10
10F：→ Tendin1015:因为我的细胞在 96-well 可以 5x10^4 cells/well 12/09 12:11
11F：→ Tendin1015:谢谢 conective，这对我很有帮助。 12/09 12:13
12F：→ Tendin1015:可是因为我的试验物质有点昂贵，我想说能不能省一点改 12/09 12:14
13F：→ Tendin1015:用 5~6 ml 的 medium 呢? 12/09 12:14
14F：推 mandible:3三楼你很有钱喔!我都只加6ml而已!! 12/09 12:34
15F：→ mandible:你要看你的细胞大小.来决定你的western量.应该会定量吧! 12/09 12:35
16F：→ Tendin1015:恩，会定量。 所以 medium 用 5 ml 应该也 OK 吧? 12/09 13:26
17F：推 FireHell:抱歉我最前面打错了，要加一个0。50000~200000 cells/mL 12/09 15:14
18F：→ FireHell:我的sample也超贵(1 mg => 10k)，但是你还是要统一细胞密 12/09 15:15
19F：→ FireHell:度，我指的是你应该跟前面的任何实验统一密度 12/09 15:18
20F：→ FireHell:因此你medium少细胞也会少，western需要不少的细胞来提供 12/09 15:19
21F：→ FireHell:足够的蛋白，以我的Hep 3B为例，我浓度是50000 cells/mL 12/09 15:20
22F：→ FireHell:1盘10 mL，CONTROL都一次重三盘全收，大概可以压十次 12/09 15:20
23F：→ FireHell:每次是50 ug 12/09 15:21
24F：→ alicialai:这些问题实验室前辈应该都有protocol吧~ 可以询问看看~ 12/12 05:39
25F：→ alicialai:喔不好意思没看到您的第一句话~ 抱歉~ 12/12 05:40
26F：→ alicialai:可以去问问隔壁实验室? 12/12 05:40
27F：→ alicialai:我养RAW cell, 10cm dish, ~90 confluent约3x10^7 cell 12/12 05:42