作者hino610325 (Syu)
看板Biotech
標題[求救] 想表現EGFP
時間Thu Dec 8 01:08:15 2011
最近剛做完一連串DNA subcloning的實驗
做的是基本款實驗
miniprep
限制酶切 + 電泳 (BamHI+XbaI)
ligation + transformation
限制酶切 + PCR
用的plasmid是pcDNA3-eGFP
因為老師一時心血來潮
想要把GFP表現出來給我們看
表現用的plasmid是BL21(DE3)
clone進去之後拿去養卻沒看到什麼結果
請問板上各位前輩
這可能是哪裡出問題？
因為我還是個初心者
我只能想到一開始實驗用的gene真的是eGFP嗎
我也只能想到用定序的方法確認...
麻煩各位前輩提供一些看法~謝謝~
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◆ From: 163.25.118.166
1F：推 dodomilk:定序啊 12/08 01:48
2F：推 Realthugz:bl21是菌株 不是plasmid... 12/08 03:05
3F：→ Realthugz:所以vector是甚麼 promoter是甚麼 12/08 03:08
4F：→ Realthugz:start/stop codon? frameshift? 12/08 03:08
5F：推 HEK293:eukaryotic promoter，pcDNA3的話 12/08 09:05
6F：推 conective:送進細胞看看吧? 12/08 10:42
7F：→ hino610325:vector是pcDNA3 12/08 14:47
8F：→ hino610325:promoter是用T7p 12/08 14:47
9F：→ hino610325:不清楚老師為什麼用T7p…切口前面剛好有一段T7的序列 12/08 14:50
10F：→ sandra12:你有加inducer嗎 12/09 00:54
11F：→ hino610325:老實說這個實驗是老師做了之後告訴我們結果 12/09 01:23
12F：→ hino610325:原本是希望我們想想看，不過原po才疏學淺.....-.- 12/09 01:24
13F：→ hino610325:應該是沒有加inducer，老師在講解的時候沒有特別提到 12/09 01:24
14F：推 icome:沒有加當然不會大量表現 12/09 13:57
15F：推 HEK293:ㄜ................... 12/09 15:33