作者hino610325 (Syu)
看板Biotech
标题[求救] 想表现EGFP
时间Thu Dec 8 01:08:15 2011
最近刚做完一连串DNA subcloning的实验
做的是基本款实验
miniprep
限制酶切 + 电泳 (BamHI+XbaI)
ligation + transformation
限制酶切 + PCR
用的plasmid是pcDNA3-eGFP
因为老师一时心血来潮
想要把GFP表现出来给我们看
表现用的plasmid是BL21(DE3)
clone进去之後拿去养却没看到什麽结果
请问板上各位前辈
这可能是哪里出问题？
因为我还是个初心者
我只能想到一开始实验用的gene真的是eGFP吗
我也只能想到用定序的方法确认...
麻烦各位前辈提供一些看法~谢谢~
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.166
1F：推 dodomilk:定序啊 12/08 01:48
2F：推 Realthugz:bl21是菌株 不是plasmid... 12/08 03:05
3F：→ Realthugz:所以vector是甚麽 promoter是甚麽 12/08 03:08
4F：→ Realthugz:start/stop codon? frameshift? 12/08 03:08
5F：推 HEK293:eukaryotic promoter，pcDNA3的话 12/08 09:05
6F：推 conective:送进细胞看看吧? 12/08 10:42
7F：→ hino610325:vector是pcDNA3 12/08 14:47
8F：→ hino610325:promoter是用T7p 12/08 14:47
9F：→ hino610325:不清楚老师为什麽用T7p…切口前面刚好有一段T7的序列 12/08 14:50
10F：→ sandra12:你有加inducer吗 12/09 00:54
11F：→ hino610325:老实说这个实验是老师做了之後告诉我们结果 12/09 01:23
12F：→ hino610325:原本是希望我们想想看，不过原po才疏学浅.....-.- 12/09 01:24
13F：→ hino610325:应该是没有加inducer，老师在讲解的时候没有特别提到 12/09 01:24
14F：推 icome:没有加当然不会大量表现 12/09 13:57
15F：推 HEK293:ㄜ................... 12/09 15:33