作者godivaa (Linda*)
看板Biotech
標題[求救] western blot加不同抗體的意義?
時間Sat Dec 3 23:57:55 2011
我至今還是搞不太懂western blot加不同一抗的意思＠＠
我是實驗室初學者 查了書也看不懂 問老師這些太基本很怪唉
我做的實驗是某蛋白A會不會被另一個蛋白B磷酸化
然後老師用了很多不同種的抗體 在western blot
其中一些抗體是Anti-A或Anti-B
那這樣做出來的片子要怎麼看呢？
如果有signal那是代表誰被誰磷酸化呢？
那不是做一次就行了嗎？為什麼要加這多種抗體做很多次？
真的是想不透這些抗體的作用。。
希望大家能幫助我：﹞
謝謝～
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◆ From: 109.175.170.93
1F：→ conan11:不管被誰磷酸化 要壓磷酸化就應該是壓phospho-A吧 12/04 01:13
2F：推 qqmango:不同ab全加下去，除非你們一抗只用一次， 12/04 09:41
3F：推 icome:不同一抗會分開做 一起做怕互相干擾 有雜band也很難釐清 12/04 10:42
4F：推 supray:看誰被誰磷酸化還要搭配inhibitor設計實驗 12/04 18:00
5F：→ supray:另外還要有protein間interaction的證據 12/04 18:02
6F：→ supray:另外跑WB的sample不是出自你手? 12/04 18:03
7F：→ supray:問問看sample的供應者怎麼設計實驗的 12/04 18:04
8F：→ supray:實驗設計其實是很高深的問題呀 12/04 18:07
9F：→ godivaa:我也有做過加inhibotor的！是說加了inhibitor的話就不會 12/04 22:46
10F：→ godivaa:有band了嗎(不會被磷酸化了)? 12/04 22:47
11F：推 alaric:如果你是碩士生, 不會, 還是快找人問清楚, 找老板最安全. 12/04 23:02
12F：推 supray:WB有signal只能代表你的membrane有你要染的東西 12/05 09:24
13F：→ supray:至於為什麼要染這個東西主要還是實驗設計的問題 12/05 09:25
14F：推 supray:就算加了inhibitor 也不一定是抑制到目標的上游 12/05 09:31
15F：→ supray:一切都要等data出來才有定論 12/05 09:32
16F：→ supray:你還要注意的是你的一抗是抗磷酸化的還是抗未磷酸化的..... 12/05 09:35
17F：→ supray:拿著你的實驗流程細節跟DATA找老闆或學長問清楚吧... 12/05 09:36
18F：推 joseph103331:不問旁邊的人跑來這問也很怪= =" 12/05 09:40
19F：→ joseph103331:可以用同片膠剪兩邊就可以用兩種抗體了~ 12/05 09:41
20F：→ supray:感覺很像新手卻被地雷老師趕鴨子上架 =.= 12/05 09:49