作者godivaa (Linda*)
看板Biotech
标题[求救] western blot加不同抗体的意义?
时间Sat Dec 3 23:57:55 2011
我至今还是搞不太懂western blot加不同一抗的意思＠＠
我是实验室初学者 查了书也看不懂 问老师这些太基本很怪唉
我做的实验是某蛋白A会不会被另一个蛋白B磷酸化
然後老师用了很多不同种的抗体 在western blot
其中一些抗体是Anti-A或Anti-B
那这样做出来的片子要怎麽看呢？
如果有signal那是代表谁被谁磷酸化呢？
那不是做一次就行了吗？为什麽要加这多种抗体做很多次？
真的是想不透这些抗体的作用。。
希望大家能帮助我：﹞
谢谢～
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 109.175.170.93
1F：→ conan11:不管被谁磷酸化 要压磷酸化就应该是压phospho-A吧 12/04 01:13
2F：推 qqmango:不同ab全加下去，除非你们一抗只用一次， 12/04 09:41
3F：推 icome:不同一抗会分开做 一起做怕互相干扰 有杂band也很难厘清 12/04 10:42
4F：推 supray:看谁被谁磷酸化还要搭配inhibitor设计实验 12/04 18:00
5F：→ supray:另外还要有protein间interaction的证据 12/04 18:02
6F：→ supray:另外跑WB的sample不是出自你手? 12/04 18:03
7F：→ supray:问问看sample的供应者怎麽设计实验的 12/04 18:04
8F：→ supray:实验设计其实是很高深的问题呀 12/04 18:07
9F：→ godivaa:我也有做过加inhibotor的！是说加了inhibitor的话就不会 12/04 22:46
10F：→ godivaa:有band了吗(不会被磷酸化了)? 12/04 22:47
11F：推 alaric:如果你是硕士生, 不会, 还是快找人问清楚, 找老板最安全. 12/04 23:02
12F：推 supray:WB有signal只能代表你的membrane有你要染的东西 12/05 09:24
13F：→ supray:至於为什麽要染这个东西主要还是实验设计的问题 12/05 09:25
14F：推 supray:就算加了inhibitor 也不一定是抑制到目标的上游 12/05 09:31
15F：→ supray:一切都要等data出来才有定论 12/05 09:32
16F：→ supray:你还要注意的是你的一抗是抗磷酸化的还是抗未磷酸化的..... 12/05 09:35
17F：→ supray:拿着你的实验流程细节跟DATA找老板或学长问清楚吧... 12/05 09:36
18F：推 joseph103331:不问旁边的人跑来这问也很怪= =" 12/05 09:40
19F：→ joseph103331:可以用同片胶剪两边就可以用两种抗体了~ 12/05 09:41
20F：→ supray:感觉很像新手却被地雷老师赶鸭子上架 =.= 12/05 09:49