作者Tendin1015 (Tendin)
看板Biotech
標題Re: [求救] Amyloid-beta 處理PC12的劑量？
時間Mon Nov 28 11:53:39 2011
※ 引述《Tendin1015 (Tendin)》之銘言：
: 使用 AB（1-40） 處理 PC12 也好一陣子了，
: 可是老闆覺得我 AB 的使用量很兇，不知道是不是有哪裡計算錯誤？
: 我是用 1 ml 去溶 AB (37℃, 24 h)。
: 聚合完之後的濃度應該是 231 μM才對 (應該吧？protocol說的)，
: 那我的 PC12（5×10^4）大約要 1.2 μM 才會達到 60% 的細胞存活率。
: 所以我的算法就是 1.2×200(μL)= 231×1.0389(μL)
: 也就是 96 well 中每個 well 含有 200 μL 的培養基(含終濃度 1.2 μM 的AB)，
: 所以我要取 1.0389 μL 的 AB＋198.9611 μL 的 medium 混和。
: 不知道我這樣的算法是不是正確？那配置的量當然也不會這麼少，
: 我大概都會以 100 個 well 配 20000 μL 的 AB。
: 請大家幫我看一下。
我們的 AB 是 1 mg 溶在 1 ml 的 PBS 裡，
要怎麼測吸光來推算濃度呢？有更詳細的步驟嗎？
另外我也一直搞不懂的是，我看許多研究也大多是用 20~100 uM，
可是這個使用量不是相對的比較多嗎？
還是說這指的不是終濃度？
因為我都是看容積(uL)，只知道算完之後多少 AB 加多少 medium 混合會到達終濃度，
然後就直接 load 200 ul 到 well 中。
因為最近也要開始跑蛋白了，用 dish 養我發現要用的 AB 太多了...
我大概需要養 30 盤，存活率要維持在 60%，請問我要怎麼去處理 AB 呢？
依各位的經驗，我大概用多少 AB 才合理呢？
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