作者Tendin1015 (Tendin)
看板Biotech
标题Re: [求救] Amyloid-beta 处理PC12的剂量?
时间Mon Nov 28 11:53:39 2011
※ 引述《Tendin1015 (Tendin)》之铭言:
: 使用 AB(1-40) 处理 PC12 也好一阵子了,
: 可是老板觉得我 AB 的使用量很凶,不知道是不是有哪里计算错误?
: 我是用 1 ml 去溶 AB (37℃, 24 h)。
: 聚合完之後的浓度应该是 231 μM才对 (应该吧?protocol说的),
: 那我的 PC12(5×10^4)大约要 1.2 μM 才会达到 60% 的细胞存活率。
: 所以我的算法就是 1.2×200(μL)= 231×1.0389(μL)
: 也就是 96 well 中每个 well 含有 200 μL 的培养基(含终浓度 1.2 μM 的AB),
: 所以我要取 1.0389 μL 的 AB+198.9611 μL 的 medium 混和。
: 不知道我这样的算法是不是正确?那配置的量当然也不会这麽少,
: 我大概都会以 100 个 well 配 20000 μL 的 AB。
: 请大家帮我看一下。
我们的 AB 是 1 mg 溶在 1 ml 的 PBS 里,
要怎麽测吸光来推算浓度呢?有更详细的步骤吗?
另外我也一直搞不懂的是,我看许多研究也大多是用 20~100 uM,
可是这个使用量不是相对的比较多吗?
还是说这指的不是终浓度?
因为我都是看容积(uL),只知道算完之後多少 AB 加多少 medium 混合会到达终浓度,
然後就直接 load 200 ul 到 well 中。
因为最近也要开始跑蛋白了,用 dish 养我发现要用的 AB 太多了...
我大概需要养 30 盘,存活率要维持在 60%,请问我要怎麽去处理 AB 呢?
依各位的经验,我大概用多少 AB 才合理呢?
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