真的要抓問題的話 每個環節都可以挑一挑..當然我不是說到處都是問題 只是強調每個環節都很重要 還有一點要確定的 就是到底有沒有關心到真正的問題在哪裡 ※ 引述《rockerwei (才女)》之銘言： : ※ 引述《rockerwei (才女)》之銘言： : : 再求救一次~我這次已經用新的buffer跑了~可是還是沒有18S和28S的band 也有聽說有的物種本來就只有一條 不一定都會有這兩條 我們就有樣本總共要有7條 : : 我在想是不是配膠的問題 : : 因為我是直接拿DNA的agarose gel來跑 有沒有汙染啊，說不定邊跑邊degrade 膠的濃度是多少呢？會不會跑不動？會不會時間不夠？是不是跳海了？ : : 請問大大們 : : 有沒有配RNA gel 的配方~~ 有，而且有很多種 從這裡開始 : 整個流程就是抽完RNA然後我拿5ul去跑膠 重點是loading多少量 (RNA的總重 ex : 0.5-1 ug) 不是體積 因為我們不知道你的比值有多少 (比值會影響濃度的正確性) 也不知道你用的濃度 可能 5 ul太稀，那當然跑不出東西 請確定 : 1.你的RNA為無色透明 2.比值及濃度 再拿來討論 : 大概是100v 跟電壓無關，50v也可以跑 : 抽RNA的流程就是用組織研磨器加上Tri-zol(3ml)放在50ml的tube裡面打碎 什麼組織？多少組織？有沒有超出reagent容許範圍？ 別人也是這樣抽有成功嗎? 如果有成功案例才拿來討論，否則請看protocol 說不定reagent根本跟樣本不合啊 : 再加入1ml的chloroform~然後votex再分裝到eppendorf裡面~ chloroform的體積依原始protocol應該是600ul吧 (抱歉應該我不清楚調體積會如何 : 等五分鐘~在離心12000rpm 10 min : 離心後取上清液 : 加入isopropanol等30min : 離心12000rpm 30min : 用DEPC-EtOH wash 離心12000rpm 10min : 吸乾酒精~加DEPC-H2O : 然後就測濃度~跑膠~~~ : 我真的不知道發生什麼問題 如果是針對跑膠的問題 拿別人抽的確定品質 OK 的 RNA 來一起跑，或是跑單股 RNA marker 如果失敗了就是跑膠出問題 如果 marker 或是標準品 OK 但你的樣本掛掉，那就是製備上的問題 很簡單吧 :) --

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