真的要抓问题的话 每个环节都可以挑一挑..当然我不是说到处都是问题 只是强调每个环节都很重要 还有一点要确定的 就是到底有没有关心到真正的问题在哪里 ※ 引述《rockerwei (才女)》之铭言： : ※ 引述《rockerwei (才女)》之铭言： : : 再求救一次~我这次已经用新的buffer跑了~可是还是没有18S和28S的band 也有听说有的物种本来就只有一条 不一定都会有这两条 我们就有样本总共要有7条 : : 我在想是不是配胶的问题 : : 因为我是直接拿DNA的agarose gel来跑 有没有污染啊，说不定边跑边degrade 胶的浓度是多少呢？会不会跑不动？会不会时间不够？是不是跳海了？ : : 请问大大们 : : 有没有配RNA gel 的配方~~ 有，而且有很多种 从这里开始 : 整个流程就是抽完RNA然後我拿5ul去跑胶 重点是loading多少量 (RNA的总重 ex : 0.5-1 ug) 不是体积 因为我们不知道你的比值有多少 (比值会影响浓度的正确性) 也不知道你用的浓度 可能 5 ul太稀，那当然跑不出东西 请确定 : 1.你的RNA为无色透明 2.比值及浓度 再拿来讨论 : 大概是100v 跟电压无关，50v也可以跑 : 抽RNA的流程就是用组织研磨器加上Tri-zol(3ml)放在50ml的tube里面打碎 什麽组织？多少组织？有没有超出reagent容许范围？ 别人也是这样抽有成功吗? 如果有成功案例才拿来讨论，否则请看protocol 说不定reagent根本跟样本不合啊 : 再加入1ml的chloroform~然後votex再分装到eppendorf里面~ chloroform的体积依原始protocol应该是600ul吧 (抱歉应该我不清楚调体积会如何 : 等五分钟~在离心12000rpm 10 min : 离心後取上清液 : 加入isopropanol等30min : 离心12000rpm 30min : 用DEPC-EtOH wash 离心12000rpm 10min : 吸乾酒精~加DEPC-H2O : 然後就测浓度~跑胶~~~ : 我真的不知道发生什麽问题 如果是针对跑胶的问题 拿别人抽的确定品质 OK 的 RNA 来一起跑，或是跑单股 RNA marker 如果失败了就是跑胶出问题 如果 marker 或是标准品 OK 但你的样本挂掉，那就是制备上的问题 很简单吧 :) --

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