作者FireHell (冥煌 = 好硬)
看板Biotech
標題Re: [求救] sample抑癌效果突然下降
時間Sun Nov 6 19:40:38 2011
※ 引述《FireHell (冥煌 = 好硬)》之銘言：
: 我的細胞是Hep 3B
: sample是一種三萜類純物質，溶解在DMSO
: 平常冰-20度C，使用前會加溫到50度C (37度C不會完全溶解)
: 細胞我會控制代數前後差異不超過7代
: sample已知光穩定、熱穩定(70度C沒問題)
: 最近發現treat同樣的濃度、時間
: MTT的存活率從4X%上升到8X%
: 請問各位高手是哪裡有問題呢？
: 目前想到的是可能反覆解凍會使sample degrade
: 不過我的sample是很穩定的應該還好吧？
: 有時後購買一些藥會寫說不可以反覆解凍，原理是什麼呢？
: 感謝回答 :)
不好意思回覆自己的文，真的是鬼打牆了
煩請各位高手幫我點出問題所在，感激不盡
我配了新的stock，保存於常溫（避免反覆解凍）、避光
舊的stock保存於-20度C，使用前加溫至50度C、避光
以同樣濃度、時間做了以下測試
（細胞代數是以我個人第一批凍起來的視為第一代計算）
舊stock treat第三代細胞 → viability = 8X%
新stock treat第三代細胞 → viability = 9X%
舊stock treat第七代細胞 → viability = 9X%
出乎意料的新stock還比較沒效一點
不過存活率這麼高，跟我之前持續數月穩定的4X%（舊stock）比起來真的差太多了
Medium是用一樣的貨號，FBS也是用一樣的"批"號（我treat時會用2% FBS medium）
Incubator內的CO2濃度、水蒸氣量都正常
實在是想不到為什麼sample會突然沒效，請教各位高手，感激不盡>"<
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◆ From: 140.112.98.115
※ 編輯: FireHell 來自: 140.112.98.115 (11/06 19:41)
1F：→ dota01:會不會是之前做MTT的那管stock濃度配錯阿 11/06 19:47
2F：→ FireHell:基本上不可能，因為我的sample難溶，我都配10 mM是極限了 11/06 19:50
3F：→ FireHell:如果配更濃的話一定不會完全溶解 11/06 19:51
4F：→ FireHell:附帶一提，我treat時的DMSO濃度都控制在0.3% 11/06 19:51
5F：→ keeny:check cell confluency b4 treatment MTT被細胞數影響頗大 11/07 02:23
6F：→ keeny:你的情形我猜是cell over confluent. 11/07 02:25
7F：→ FireHell:請問樓上指的是細胞密度太高嗎？我是5000 cells/well 11/07 13:33
8F：推 ararthur:microplasma? 曾經因此原因而藥效大降 11/07 14:22