作者silencewing (mIng)
看板Biotech
標題[求救] 酒精誘導發炎反應步驟?
時間Fri Nov 4 12:34:32 2011
首先感謝花點時間進來看的各位
最近老闆叫我做"酒精誘導發炎反應"的實驗
大致內容為:酒精treat HepG2細胞，然後要看看我們的藥物是不是可以抑制發炎反應
看了一些文獻期刊~很少說到如何操作這類的實驗
然後由兩篇期刊中說:同時treat 酒精跟藥物 24hr
就可以做接下來的實驗了(抽RNA)
所以我依照期刊內容做了以下實驗步驟~請各位幫我看看哪邊有問題~拜託指導
1.將HepG2貼在24well plate中 每well細胞:1x10^5顆
2.隔天去除原medium,加入含有酒精(J.K.Baker分生用)和藥物的medium
(酒精最終濃度為100mM)
3.24hr後收取total RNA
4.轉RT~做QPCR偵測發炎相關基因表現(TNF-a,IL-1b,cox-2,NFkB,iNOS)
我的結果主要是酒精無法或很少induce這些基因的表現><
有做過類似實驗的人可以幫我解惑嗎?拜託~~感謝
P.S.我的酒精算法為:純酒精 分子量:46.07 密度:0.789g/cm^3 (25度)
所以 莫耳數:789/46.07=17.1
體機莫耳濃度為:17.1M
working濃度算法: M1V1=M2V2
17100*X=1200 *100
(medium) (最終濃度100mM)
X=7 所以我是1193ulmedium+7ul酒精
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.174.204
1F：推 cecik:就我之前的經驗，HepG2對酒精抗性蠻高的，我之前都用3-400mM 11/05 14:48
2F：→ cecik:處理24hr以上，要是細胞還是對酒精不敏感的話，就改用 11/05 14:49
3F：→ cecik:acetaldehyde吧，其實這方面的研究應該很多，關鍵字:酒精、 11/05 14:51
4F：→ cecik:肝、發炎等等，另外你要看的發炎指標其實RNA似乎不是最好的 11/05 14:51
5F：→ cecik:方式，像TNF或IL可以試試看策medium中的濃度，NFkB要看核內 11/05 14:53
6F：→ cecik:的轉移量及DNA binding程度，因為我不是做發炎的所以可能有 11/05 14:54
7F：→ cecik:些地方不一定準確，不過你可以朝這個方向去查ref 11/05 14:54
8F：推 sam371:acetaldehyde似乎是毒化物管制 11/06 01:11