作者silencewing (mIng)
看板Biotech
标题[求救] 酒精诱导发炎反应步骤?
时间Fri Nov 4 12:34:32 2011
首先感谢花点时间进来看的各位
最近老板叫我做"酒精诱导发炎反应"的实验
大致内容为:酒精treat HepG2细胞，然後要看看我们的药物是不是可以抑制发炎反应
看了一些文献期刊~很少说到如何操作这类的实验
然後由两篇期刊中说:同时treat 酒精跟药物 24hr
就可以做接下来的实验了(抽RNA)
所以我依照期刊内容做了以下实验步骤~请各位帮我看看哪边有问题~拜托指导
1.将HepG2贴在24well plate中 每well细胞:1x10^5颗
2.隔天去除原medium,加入含有酒精(J.K.Baker分生用)和药物的medium
(酒精最终浓度为100mM)
3.24hr後收取total RNA
4.转RT~做QPCR侦测发炎相关基因表现(TNF-a,IL-1b,cox-2,NFkB,iNOS)
我的结果主要是酒精无法或很少induce这些基因的表现><
有做过类似实验的人可以帮我解惑吗?拜托~~感谢
P.S.我的酒精算法为:纯酒精 分子量:46.07 密度:0.789g/cm^3 (25度)
所以 莫耳数:789/46.07=17.1
体机莫耳浓度为:17.1M
working浓度算法: M1V1=M2V2
17100*X=1200 *100
(medium) (最终浓度100mM)
X=7 所以我是1193ulmedium+7ul酒精
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.174.204
1F：推 cecik:就我之前的经验，HepG2对酒精抗性蛮高的，我之前都用3-400mM 11/05 14:48
2F：→ cecik:处理24hr以上，要是细胞还是对酒精不敏感的话，就改用 11/05 14:49
3F：→ cecik:acetaldehyde吧，其实这方面的研究应该很多，关键字:酒精、 11/05 14:51
4F：→ cecik:肝、发炎等等，另外你要看的发炎指标其实RNA似乎不是最好的 11/05 14:51
5F：→ cecik:方式，像TNF或IL可以试试看策medium中的浓度，NFkB要看核内 11/05 14:53
6F：→ cecik:的转移量及DNA binding程度，因为我不是做发炎的所以可能有 11/05 14:54
7F：→ cecik:些地方不一定准确，不过你可以朝这个方向去查ref 11/05 14:54
8F：推 sam371:acetaldehyde似乎是毒化物管制 11/06 01:11