作者YMH (Alex)
看板Biotech
標題[求救] 轉染進293T的基因在western壓出多條band
時間Tue Oct 25 21:42:32 2011
我使用lipofectamine將plasmid轉染進293T，
48小時後收細胞，用RIPA buffer抽total protein，
跑western看轉染效果。
理論上，該基因的大小約130kD左右，
但是western壓片出來的結果，
除了130kD以外，
我發現在大於130kD看到還兩條band，約95kD上下也有個兩條band，
不像是雜band，因為我有做dose，這些所謂"雜band"也有隨我的劑量增加...
稍微查了下資料後，這個基因似乎會被SUMOylation，
其位置和大於130kD的兩條band也符合，
另外也有alternative splicing，大小也和95kD附近那兩條符合，
這樣看起來好像可以解釋，
但是，plasmid上的基因是有myc tag的，
結果我用anti-myc去壓片時，完全沒有看到那些"雜band"....
難道tag protein也會被切掉嗎?困惑= =
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.170
1F：推 desirable:你賺到了，快點把band切下來打MASS。XD 10/25 22:05
2F：→ YMH:是有打算要打啦XD，剛剛想到有沒有可能是incomplete reduction 10/25 22:23
3F：→ YMH:然後那些小band會不會是tag掉落的degrade form? 10/25 22:36
4F：→ saviora:跑PCR試看看 10/25 23:04
5F：→ ko363630:可以問一下 為什麼賺到了? 10/28 01:03