作者YMH (Alex)
看板Biotech
标题[求救] 转染进293T的基因在western压出多条band
时间Tue Oct 25 21:42:32 2011
我使用lipofectamine将plasmid转染进293T，
48小时後收细胞，用RIPA buffer抽total protein，
跑western看转染效果。
理论上，该基因的大小约130kD左右，
但是western压片出来的结果，
除了130kD以外，
我发现在大於130kD看到还两条band，约95kD上下也有个两条band，
不像是杂band，因为我有做dose，这些所谓"杂band"也有随我的剂量增加...
稍微查了下资料後，这个基因似乎会被SUMOylation，
其位置和大於130kD的两条band也符合，
另外也有alternative splicing，大小也和95kD附近那两条符合，
这样看起来好像可以解释，
但是，plasmid上的基因是有myc tag的，
结果我用anti-myc去压片时，完全没有看到那些"杂band"....
难道tag protein也会被切掉吗?困惑= =
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◆ From: 163.25.118.170
1F：推 desirable:你赚到了，快点把band切下来打MASS。XD 10/25 22:05
2F：→ YMH:是有打算要打啦XD，刚刚想到有没有可能是incomplete reduction 10/25 22:23
3F：→ YMH:然後那些小band会不会是tag掉落的degrade form? 10/25 22:36
4F：→ saviora:跑PCR试看看 10/25 23:04
5F：→ ko363630:可以问一下 为什麽赚到了? 10/28 01:03