作者rockerwei (才女)
看板Biotech
標題Re: [求救] 用舊的agarose gel跑RNA
時間Sat Oct 22 20:00:38 2011
※ 引述《pocession (阿宗)》之銘言：
: ※ 引述《rockerwei (才女)》之銘言：
: : 今天用做了一個禮拜的agarose gel跑RNA
: : 結果照膠的時候發現RNA都變成degrade的狀態了
: : 不過測O.D.又是正常的
: : 請問是不是要run RNA gel最好還是用新的膠run
: : P.S.我是早上抽RNA下午跑應該沒有冰凍解凍的問題
: 根據經驗
: 如果你的agarose gel做好後，是以密封的方式保存 (E.G 放在保鮮盒)
: 而且保存用的buffer是乾淨的 (E.G DEPC water)，
: 跑的時候buffer也是新鮮配製的
: 那放一個禮拜以上的膠並不會讓sample產生degrade
: 還有 就算是degrade的RNA也是測得到OD的，OD不代表完整性
: 不過就像推文說的 還是要跑marker才能判斷妳的情況
不過我們實驗室也只有用DNA maker來看18s和28s是不是對的
DNA maker跑得很正常
(RNA有特別的maker嗎?)
我們的膠只是單純放在一般的保鮮盒
buffer已經跑到都要不行了
所以還是要用全新的膠全新的buffer來跑會比較好就對了
(因為實驗室check PCR pruduct也都是用舊得膠舊的buffer跑~但band都很正常)
因為在以前的實驗室都是要跑才做膠所以RNA也都是正常的
(而且還有先denature處理過才跑，做的膠有外加ATA)
所以不確定是因為跑舊膠的問題還是沒有經過denature的處理
(現在的實驗室有點窮，所以都沒有處理RNA就直接跑了~)
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 220.137.13.206
1F：→ huuban:有RNA marker喔，單股雙股都有，頗貴的... 10/22 20:44
2F：→ Realthugz:膠我都做好泡在buffer放上個把月的... 10/22 22:27
3F：→ Realthugz:如果是看18s 28s我是跑過的 非現做的膠沒問題... 10/22 22:28
4F：→ Realthugz:我是菌液加phenol上清拿去跑 都看得到那兩條喔 10/22 22:30
5F：→ Realthugz:以上主要是跑看有無plasmid 會順便看到18s 28s 10/22 22:32
6F：→ Realthugz:歐 菌應該是 16s 23s 10/22 22:34
7F：→ popopig2000:denature就利用formaldehyde和加溫65度就好了 10/23 00:27