作者aggaci (台南工作的基隆人)
看板Biotech
標題[方法] 關於用lentivirus感染primary neuron
時間Sat Oct 15 00:54:16 2011
大家 不好意思
我想請教各為一個關於lentivirus感染neuron的問題
我用lentivirus去感染neuron效率一直都不好
我的作法是收10盤10公分dish的293FT的上清液(共200 ml)
過.45 filter之後超高速離心純化病毒以200 ul的PBS+1% BSA回溶
這時病毒濃度極高，光5 ul就可以讓一盤10cm的SH-SY5Y全部表現GFP (效率應該有9成)
但這時我將這病毒濃縮液加100到一個6公分 dish的neuron(貼盤後3天的神經細胞)
表現GFP的neuron約1成不到....(對不起 我沒測titer XD)
astrocyte占全部細胞其實不多(約5%以下)，
但不知為何 感染成功的幾乎都是astrocyte.........= =
我有去問有達到號稱有95%感染效率的實驗室
他說他的作法是收10盤細胞的上清液(200ml)濃縮後全部加到12well的""一個well""
這樣可以有90%以上的效率
我聽了差點昏倒，養那麼多293T、離心濃縮如此的耗時
卻只能感染一個12well的"一個well"???????????!!!!
不曉得大家是否能給我一些建議
還是adenovirus會比較好?
謝謝
謝謝你!!!
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◆ From: 140.116.253.121
※ 編輯: aggaci 來自: 140.116.253.121 (10/15 00:54)
1F：推 conective:問一下那個實驗室有沒有測titer跟算過M.O.I? 10/15 10:05
2F：→ conective:另外是說那個實驗室感染的也是neuron嗎？ 10/15 10:06
3F：推 conective:你的neuron是你自己作分化的嗎？其他95%是什麼神經細胞 10/15 10:08
4F：→ aggaci:他們記得是有...不過我忘了MOI是多少了 是primary neuron 10/15 17:09
5F：→ aggaci:保守估計90%以上幾乎都neuron吧 10/15 17:10
6F：→ rimeni:adenovirus效率會不會高一點? 10/16 11:46
7F：推 allisa:我記得看過PAPER說neuron要用adenovirus效率比較高 10/19 20:01
8F：推 mandible:濃縮完之後可以放大阿~~ 10/20 16:13