作者aggaci (台南工作的基隆人)
看板Biotech
标题[方法] 关於用lentivirus感染primary neuron
时间Sat Oct 15 00:54:16 2011
大家 不好意思
我想请教各为一个关於lentivirus感染neuron的问题
我用lentivirus去感染neuron效率一直都不好
我的作法是收10盘10公分dish的293FT的上清液(共200 ml)
过.45 filter之後超高速离心纯化病毒以200 ul的PBS+1% BSA回溶
这时病毒浓度极高，光5 ul就可以让一盘10cm的SH-SY5Y全部表现GFP (效率应该有9成)
但这时我将这病毒浓缩液加100到一个6公分 dish的neuron(贴盘後3天的神经细胞)
表现GFP的neuron约1成不到....(对不起 我没测titer XD)
astrocyte占全部细胞其实不多(约5%以下)，
但不知为何 感染成功的几乎都是astrocyte.........= =
我有去问有达到号称有95%感染效率的实验室
他说他的作法是收10盘细胞的上清液(200ml)浓缩後全部加到12well的""一个well""
这样可以有90%以上的效率
我听了差点昏倒，养那麽多293T、离心浓缩如此的耗时
却只能感染一个12well的"一个well"???????????!!!!
不晓得大家是否能给我一些建议
还是adenovirus会比较好?
谢谢
谢谢你!!!
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◆ From: 140.116.253.121
※ 编辑: aggaci 来自: 140.116.253.121 (10/15 00:54)
1F：推 conective:问一下那个实验室有没有测titer跟算过M.O.I? 10/15 10:05
2F：→ conective:另外是说那个实验室感染的也是neuron吗？ 10/15 10:06
3F：推 conective:你的neuron是你自己作分化的吗？其他95%是什麽神经细胞 10/15 10:08
4F：→ aggaci:他们记得是有...不过我忘了MOI是多少了 是primary neuron 10/15 17:09
5F：→ aggaci:保守估计90%以上几乎都neuron吧 10/15 17:10
6F：→ rimeni:adenovirus效率会不会高一点? 10/16 11:46
7F：推 allisa:我记得看过PAPER说neuron要用adenovirus效率比较高 10/19 20:01
8F：推 mandible:浓缩完之後可以放大阿~~ 10/20 16:13