作者cutebetty (Qb)
看板Biotech
標題[求救] Western blot buffer配方差別
時間Thu Oct 13 09:39:01 2011
最近剛換到一個新的實驗室
因為負責泡Western的buffer 所以發現跟之前實驗室的配方差很大
當初的實驗室是5X SDS runnung buffer
現在是10X SDS runnung buffer
兩者的配方完全一樣 表示之前我跑的濃度是現在的兩倍
我網路查詢的結果是兩種配方都有人用
我只是比較好奇跑出來的差異在那邊
問題比較嚴重的是 10X transfer buffer
之前實驗室的配方是 30.285g Tris-base/ 144g glycine pH8.3 final 1L
但是現在實驗室是 121.1g Tris-base/ 14.4g glycine pH8.8 final 1L
一整個差很大
上面的配方會稀釋搭配SDS使用 下面的則不使用SDS
但網路上我都查不到下面這個配方
請問一下有經驗的版友 有人使用過嗎
為什麼Tris的濃度那麼高
超好奇的
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.42.79.92
1F：→ roy047:要稀釋到1X才能拿來跑~ 10/13 10:17
2F：→ g010377:10X 5X應該是stock的濃度吧? 要使用需dilute成1X? 10/13 13:35
我的意思是說現在這LAB的10X running buffer跟我們之前5X buffer所秤出來的鹽一樣
表示現在稀釋成1X的話 final的濃度只有之前稀釋成1X的一半
3F：→ robertkoch:transfer buffer的確很可疑@_@ 10/13 13:36
4F：推 windyflyer:我們家的是第一種 第二種的tris跟glycine相反了@@" 10/13 15:08
我後來問這邊的博士後 他說他一進來transfer buffer 就是這配方了
也沒有出甚麼問題 只是我很好奇這配方怎麼會差那麼多
5F：→ robertkoch:反過來配我覺得會省很多... 10/13 18:28
6F：推 owl628:transfer buffer的差異是不是一個是濕式一個是semi-dry的配 10/13 21:17
7F：→ owl628:方,印象中兩者的配方差滿多的,加的東西量都相反 10/13 21:17
兩個實驗室都是用濕式的~所以才奇怪
8F：推 kakaman:transfer buffer沒加SDS也可以用阿~~ 10/16 01:47
這邊都沒加SDS 所以應該可以用吧~我再觀察一下他們實驗的詳細步驟好了
※ 編輯: cutebetty 來自: 114.36.96.5 (10/17 15:03)