作者cutebetty (Qb)
看板Biotech
标题[求救] Western blot buffer配方差别
时间Thu Oct 13 09:39:01 2011
最近刚换到一个新的实验室
因为负责泡Western的buffer 所以发现跟之前实验室的配方差很大
当初的实验室是5X SDS runnung buffer
现在是10X SDS runnung buffer
两者的配方完全一样 表示之前我跑的浓度是现在的两倍
我网路查询的结果是两种配方都有人用
我只是比较好奇跑出来的差异在那边
问题比较严重的是 10X transfer buffer
之前实验室的配方是 30.285g Tris-base/ 144g glycine pH8.3 final 1L
但是现在实验室是 121.1g Tris-base/ 14.4g glycine pH8.8 final 1L
一整个差很大
上面的配方会稀释搭配SDS使用 下面的则不使用SDS
但网路上我都查不到下面这个配方
请问一下有经验的版友 有人使用过吗
为什麽Tris的浓度那麽高
超好奇的
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.42.79.92
1F：→ roy047:要稀释到1X才能拿来跑~ 10/13 10:17
2F：→ g010377:10X 5X应该是stock的浓度吧? 要使用需dilute成1X? 10/13 13:35
我的意思是说现在这LAB的10X running buffer跟我们之前5X buffer所秤出来的盐一样
表示现在稀释成1X的话 final的浓度只有之前稀释成1X的一半
3F：→ robertkoch:transfer buffer的确很可疑@_@ 10/13 13:36
4F：推 windyflyer:我们家的是第一种 第二种的tris跟glycine相反了@@" 10/13 15:08
我後来问这边的博士後 他说他一进来transfer buffer 就是这配方了
也没有出甚麽问题 只是我很好奇这配方怎麽会差那麽多
5F：→ robertkoch:反过来配我觉得会省很多... 10/13 18:28
6F：推 owl628:transfer buffer的差异是不是一个是湿式一个是semi-dry的配 10/13 21:17
7F：→ owl628:方,印象中两者的配方差满多的,加的东西量都相反 10/13 21:17
两个实验室都是用湿式的~所以才奇怪
8F：推 kakaman:transfer buffer没加SDS也可以用阿~~ 10/16 01:47
这边都没加SDS 所以应该可以用吧~我再观察一下他们实验的详细步骤好了
※ 编辑: cutebetty 来自: 114.36.96.5 (10/17 15:03)