作者siberianiris (紫色鳶尾花~)
看板Biotech
標題[求救] 限制酉每反應後band向上移??
時間Wed Oct 12 22:51:34 2011
請問大家~
我的PCR產物片段大小是650bp
用KpnI(NEB)單切會切成兩段400和250bp
H2O 3
10X Bfr 1
KpnI 1
DNA 5
total 10ul 反應37度C 3hr
但是最近遇到一個問題是
(之前都沒有發生過 其他酵素也沒有這種情況)
不管是PCR產物有無KpnI的切點
只要有加KpnI反應
電泳後，在原本650bp的band上方都會有一條淡淡band
原本以為是PCR產物可能有兩條很接近的band
但是經過確認後發現是single band
問題就是有加KpnI反應後，即使沒有切
就是會有多餘的band在上方~
換了新酵素也是同樣的情形
請問大家是否有遇過類似的情形呢？
先謝謝各位~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.27.164.222
1F：→ huuban:是很近的貼在一起，還是有一段空隔呢？ 10/13 01:53
2F：→ huuban:另外，"酶"，這個字是可以打得出來的唷 10/13 01:54
3F：→ siberianiris:本來650 kpnI處理後 變成 700和650 10/13 11:49
4F：→ siberianiris:然後kpnI有切的話 400那條上面會再多一條淡淡的500 10/13 11:49
5F：→ huuban:之前有碰過這種狀況，後來發現是跑膠的問題.. 10/13 14:58
6F：→ huuban:那時候是放切膠台照才知道其實是一個band，但它是斜的 10/13 14:59
7F：→ huuban:所以立起來從上面照膠就像是兩個，不知道你是否也是這狀況 10/13 15:00
8F：→ siberianiris:謝H大~~ 下次會看看是不是這情況~ 10/13 18:05
9F：推 bibico:請參考物理學的光之折射效應 10/17 19:34
10F：推 simonmiho:映像中..transfer buffer 的MeOH含量提高有助於小分子 10/19 23:58
11F：→ simonmiho:的transfer (10%~20%) 10/19 23:58