作者siberianiris (紫色鸢尾花~)
看板Biotech
标题[求救] 限制酉每反应後band向上移??
时间Wed Oct 12 22:51:34 2011
请问大家~
我的PCR产物片段大小是650bp
用KpnI(NEB)单切会切成两段400和250bp
H2O 3
10X Bfr 1
KpnI 1
DNA 5
total 10ul 反应37度C 3hr
但是最近遇到一个问题是
(之前都没有发生过 其他酵素也没有这种情况)
不管是PCR产物有无KpnI的切点
只要有加KpnI反应
电泳後，在原本650bp的band上方都会有一条淡淡band
原本以为是PCR产物可能有两条很接近的band
但是经过确认後发现是single band
问题就是有加KpnI反应後，即使没有切
就是会有多余的band在上方~
换了新酵素也是同样的情形
请问大家是否有遇过类似的情形呢？
先谢谢各位~
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◆ From: 114.27.164.222
1F：→ huuban:是很近的贴在一起，还是有一段空隔呢？ 10/13 01:53
2F：→ huuban:另外，"酶"，这个字是可以打得出来的唷 10/13 01:54
3F：→ siberianiris:本来650 kpnI处理後 变成 700和650 10/13 11:49
4F：→ siberianiris:然後kpnI有切的话 400那条上面会再多一条淡淡的500 10/13 11:49
5F：→ huuban:之前有碰过这种状况，後来发现是跑胶的问题.. 10/13 14:58
6F：→ huuban:那时候是放切胶台照才知道其实是一个band，但它是斜的 10/13 14:59
7F：→ huuban:所以立起来从上面照胶就像是两个，不知道你是否也是这状况 10/13 15:00
8F：→ siberianiris:谢H大~~ 下次会看看是不是这情况~ 10/13 18:05
9F：推 bibico:请参考物理学的光之折射效应 10/17 19:34
10F：推 simonmiho:映像中..transfer buffer 的MeOH含量提高有助於小分子 10/19 23:58
11F：→ simonmiho:的transfer (10%~20%) 10/19 23:58