作者shufa (123)
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標題[求救] 凍RAW264.7 MACROPHAGE的方法
時間Wed Oct 12 10:44:33 2011
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
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目前我凍細胞的方式如下：
將滿盤的細胞 以PBS WASH後 加入少許的MEDIUM
以刮的方式將細胞收集 隨後以離心的方式(1300RPM 30MIN 4度C)
收集細胞團並加入含5％DMSO的medium(配完即放入冰桶中)
凍細胞時間如下： 4度c 30min
-20度c 30min
-80度c overnight（16~18hr）
放入液態氮中保存
要使用前解凍 就先在37度c下回溫
然後seeding於10cm盤培養overnight
但隔天要換medium時 發現細胞都沒貼盤～～
不知道是出了什麼問題？
有去詢問當初給細胞的人 他是說 必須很小心 不能很大力的沖
但是此次作出的結果還是不會活
因此想請問是否有什麼技巧或步驟仍需要改善的？
先謝謝大家的回答！感恩～～
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 120.126.41.40
1F：推 williamyang:離心有需要30min嗎?我都是1000rpm,3min就都離下來. 10/12 14:44
2F：→ shufa:筆誤筆誤～～5min啦！ 10/12 17:08
3F：推 Phaeton:PASSAGE 我會用DMEM WASH(一滴一滴加) 再用刮刀 (覆蓋足 10/13 00:22
4F：→ Phaeton:量的液體) 若凍細胞的話 5% DMSO DMEM RESUSPEND PELLETS 10/13 00:23
5F：→ Phaeton:再放到凍管和凍盒(ISOPROPONAL那種 後來有種金屬塊在中間 10/13 00:24
6F：→ Phaeton:死亡率比較高) 放到凍盒後 -80 OVERNIGHT 再放到液態氮 10/13 00:24
7F：→ Phaeton:理論上 下次解凍 存活率有九成 10/13 00:25