作者shufa (123)
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标题[求救] 冻RAW264.7 MACROPHAGE的方法
时间Wed Oct 12 10:44:33 2011
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
目前我冻细胞的方式如下：
将满盘的细胞 以PBS WASH後 加入少许的MEDIUM
以刮的方式将细胞收集 随後以离心的方式(1300RPM 30MIN 4度C)
收集细胞团并加入含5％DMSO的medium(配完即放入冰桶中)
冻细胞时间如下： 4度c 30min
-20度c 30min
-80度c overnight（16~18hr）
放入液态氮中保存
要使用前解冻 就先在37度c下回温
然後seeding於10cm盘培养overnight
但隔天要换medium时 发现细胞都没贴盘～～
不知道是出了什麽问题？
有去询问当初给细胞的人 他是说 必须很小心 不能很大力的冲
但是此次作出的结果还是不会活
因此想请问是否有什麽技巧或步骤仍需要改善的？
先谢谢大家的回答！感恩～～
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 120.126.41.40
1F：推 williamyang:离心有需要30min吗?我都是1000rpm,3min就都离下来. 10/12 14:44
2F：→ shufa:笔误笔误～～5min啦！ 10/12 17:08
3F：推 Phaeton:PASSAGE 我会用DMEM WASH(一滴一滴加) 再用刮刀 (覆盖足 10/13 00:22
4F：→ Phaeton:量的液体) 若冻细胞的话 5% DMSO DMEM RESUSPEND PELLETS 10/13 00:23
5F：→ Phaeton:再放到冻管和冻盒(ISOPROPONAL那种 後来有种金属块在中间 10/13 00:24
6F：→ Phaeton:死亡率比较高) 放到冻盒後 -80 OVERNIGHT 再放到液态氮 10/13 00:24
7F：→ Phaeton:理论上 下次解冻 存活率有九成 10/13 00:25