作者ab15920 (癮)
看板Biotech
標題[求救] Western 問題～
時間Fri Oct 7 21:04:22 2011
請問大家~
我的蛋白質是一種cytokine
很小(8~14 kd)且量也很少
我用western 來做…..都壓不到band
另外有用ELISA測過，量大約為5000 pg/ml (這是我有overexpression後的)
請問一下~
Western 是因為量太少，所以才壓不出來嗎?
還是western 方面上有哪些地方需要注意的
再來就是，
ELISA的結果可以取代western的結果嗎? (因為我想都是測protein表現量)
麻煩大家幫我解決這困擾很久的問題嚕~
非常感激
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《生命》
《
就該浪費在美好滴事物上》
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.226.185
1F：→ williamyang:trysine PAGE,和.22 memebrane試試看 10/07 21:28
2F：推 FireHell:loading多少protein? 目標很少的話至少要50 ug喔 10/07 21:32
3F：→ FireHell:另外二抗不可以染太久 10/07 21:32
4F：→ ab15920:trysin PAGE是指用methanol 活化 NC PAPER 嗎？ 10/07 21:53
5F：→ ab15920:我有用<20kD 的NC PAPER了～ 10/07 21:54
6F：→ ab15920:protein是放200ug/well 而2抗染1小時 10/07 21:55
7F：→ williamyang:sorry,是tricine SDS page 10/07 21:59
9F：→ williamyang:還有NC不能放進去100% methanol,會溶解.XD 10/07 22:02
10F：→ ab15920:謝謝williamyang~ 10/07 22:03
11F：推 NKTcell:跑Tricine SDS PAGE 10/07 23:38
12F：推 yaprint:請問小分子的TRANSFER條件 電壓與時間要怎樣拿捏比較好？ 10/08 01:06
13F：推 Invec:我的目標蛋白10kD，Wet transfer 400mA 1hr效果不錯 10/08 02:03
14F：推 icome:之前看protocol說小分子transfer要提高methanol含量到50% 10/10 18:58