作者ab15920 (瘾)
看板Biotech
标题[求救] Western 问题～
时间Fri Oct 7 21:04:22 2011
请问大家~
我的蛋白质是一种cytokine
很小(8~14 kd)且量也很少
我用western 来做…..都压不到band
另外有用ELISA测过，量大约为5000 pg/ml (这是我有overexpression後的)
请问一下~
Western 是因为量太少，所以才压不出来吗?
还是western 方面上有哪些地方需要注意的
再来就是，
ELISA的结果可以取代western的结果吗? (因为我想都是测protein表现量)
麻烦大家帮我解决这困扰很久的问题噜~
非常感激
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《生命》
《
就该浪费在美好滴事物上》
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◆ From: 140.112.226.185
1F：→ williamyang:trysine PAGE,和.22 memebrane试试看 10/07 21:28
2F：推 FireHell:loading多少protein? 目标很少的话至少要50 ug喔 10/07 21:32
3F：→ FireHell:另外二抗不可以染太久 10/07 21:32
4F：→ ab15920:trysin PAGE是指用methanol 活化 NC PAPER 吗？ 10/07 21:53
5F：→ ab15920:我有用<20kD 的NC PAPER了～ 10/07 21:54
6F：→ ab15920:protein是放200ug/well 而2抗染1小时 10/07 21:55
7F：→ williamyang:sorry,是tricine SDS page 10/07 21:59
9F：→ williamyang:还有NC不能放进去100% methanol,会溶解.XD 10/07 22:02
10F：→ ab15920:谢谢williamyang~ 10/07 22:03
11F：推 NKTcell:跑Tricine SDS PAGE 10/07 23:38
12F：推 yaprint:请问小分子的TRANSFER条件 电压与时间要怎样拿捏比较好？ 10/08 01:06
13F：推 Invec:我的目标蛋白10kD，Wet transfer 400mA 1hr效果不错 10/08 02:03
14F：推 icome:之前看protocol说小分子transfer要提高methanol含量到50% 10/10 18:58