作者boblu (六百)
看板Biotech
標題Re: [求救] His-tag protein 純化 無法binding
時間Fri Oct 7 20:41:54 2011
不用 urea 的理由其實有點奇怪
你確定你不 denature, 這蛋白質就是有效的嗎？
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真的死也不想 denature 的話, 那把 his-tag 換個位置看看吧
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◆ From: 97.92.0.104
1F：推 TOTO:他用native的理由很合理啊，你不知道refolding後的結構仍一樣 10/07 21:10
2F：→ boblu:我的意思是 E.coli 表現出來的你本來就不知道是不是native 10/07 22:57
3F：→ diffa2:雖然用E.coli表現出來的protein不確定是native，但在經過 10/08 02:26
4F：→ diffa2:denature後renature程序是否會增加protein folding的不正確 10/08 02:31
5F：→ diffa2:性?才想避免這個過程 10/08 02:32
我的意思是 現在反正也不知道你生產出來的東西 folding 到底對不對
然後又純化不出來 那何不試試看 denature
即便之後 refolding 不成功
嘗試純化 denatured protein 的過程也會得到很多有助於 troubleshooting 的資訊
成本又多不了多少 就多養一批菌 多用一個透析袋而已
而且又不是同時只能做一個實驗
試著純化 denatured protein 的同時 還可以
1. 調整養菌的條件
2. （評估是否需要）重做 construct, 把 his tag 接到另一頭
※ 編輯: boblu 來自: 97.92.0.104 (10/08 22:03)