作者boblu (六百)
看板Biotech
标题Re: [求救] His-tag protein 纯化 无法binding
时间Fri Oct 7 20:41:54 2011
不用 urea 的理由其实有点奇怪
你确定你不 denature, 这蛋白质就是有效的吗？
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真的死也不想 denature 的话, 那把 his-tag 换个位置看看吧
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 97.92.0.104
1F：推 TOTO:他用native的理由很合理啊，你不知道refolding後的结构仍一样 10/07 21:10
2F：→ boblu:我的意思是 E.coli 表现出来的你本来就不知道是不是native 10/07 22:57
3F：→ diffa2:虽然用E.coli表现出来的protein不确定是native，但在经过 10/08 02:26
4F：→ diffa2:denature後renature程序是否会增加protein folding的不正确 10/08 02:31
5F：→ diffa2:性?才想避免这个过程 10/08 02:32
我的意思是 现在反正也不知道你生产出来的东西 folding 到底对不对
然後又纯化不出来 那何不试试看 denature
即便之後 refolding 不成功
尝试纯化 denatured protein 的过程也会得到很多有助於 troubleshooting 的资讯
成本又多不了多少 就多养一批菌 多用一个透析袋而已
而且又不是同时只能做一个实验
试着纯化 denatured protein 的同时 还可以
1. 调整养菌的条件
2. （评估是否需要）重做 construct, 把 his tag 接到另一头
※ 编辑: boblu 来自: 97.92.0.104 (10/08 22:03)